污水處理設備 污泥處理設備 水處理過濾器 軟化水設備/除鹽設備 純凈水設備 消毒設備|加藥設備 供水/儲水/集水/排水/輔助 水處理膜 過濾器濾芯 水處理濾料 水處理劑 水處理填料 其它水處理設備
山東持正環(huán)境檢測技術(shù)有限公司
山東持正環(huán)境檢測技術(shù)有限公司
產(chǎn)品型號
品 牌
廠商性質(zhì)其他
所 在 地濟南市
聯(lián)系方式：袁經(jīng)理查看聯(lián)系方式
更新時間：2022-08-03 14:24:11瀏覽次數(shù)：1037次
聯(lián)系我時，請告知來自 環(huán)保在線| 檢測項目 | 生物污染檢測,物理污染監(jiān)測,其他 |
|---|
核酸PCR實驗室檢測是目前可靠的篩查和確認手段，使用也為普遍。而核酸檢測方法中，PCR儀無疑是本次檢測的關鍵利器。
核酸PCR實驗室檢測具體流程
近日，北京協(xié)和發(fā)布了病毒核酸檢測標準操作流程的培訓視頻，供其他符合條件的醫(yī)療機構(gòu)在開展病毒核酸檢測時參考。
一、個人三級防護穿戴
帶一次性帽子、佩戴科研N95、一次性鞋套、一次性防水靴套、一層乳膠手套、外層一次性*、防護目鏡、第二層乳膠手套、穿戴完畢后應盡快通過緩沖間或者走廊，進入核酸提取區(qū)（業(yè)核酸提取實驗室）。
二、樣本滅活處理
核酸檢測須有兩名工作人員快速通過進入實驗室，進行滅活實驗操作。生物安全柜內(nèi)需配備吸水棉與消毒酒精、有條件可配備吸水臺布，對樣本溢灑時進行緊急處理；打開二級容器，用75%酒精消毒物體表面，檢測樣本管密閉性后進行滅活處理，滅活條件（56℃，30min，恒溫樣本滅菌儀等多種方式），取出酒精滅活管用酒精擦拭外表，將樣本放入到生物安全柜內(nèi)。
三、手工核酸提取
操作人員進入試劑配置區(qū)或者單獨的潔凈實驗室。
一、試劑區(qū)準備
根據(jù)說明說要求，在AW1中加入無水乙醇130mL，在AW2中加入無水乙醇160mL，計入無水乙醇后及時做好標記，在310μg的Carrier RNA中加入310μL AVE，并顛倒混勻使Carrier RNA充分溶解，就此完成洗液AW1、洗液AW2和Carrier RNA配置，而后通過傳遞窗傳送到樣本處理區(qū)，或者由人送到核酸提取實驗室中。
二、樣本的裂解
用1.5ml的無菌EP管，移液器移取560μl AVL裂解液，加入5.6μl Carrier RNA，加入140μl的已滅活的待提取核酸的待測樣本，渦旋振蕩15s，室溫靜止10min。將上述EP管放入離心機內(nèi)瞬時離心以去除可能殘留在EP管蓋上的裂解產(chǎn)物，防止污染。裂解完成后，加入560μl無水乙醇，振蕩混勻15s，將上述EP管放入離心機內(nèi)瞬時離心以去除可能殘留在EP管蓋上的裂解產(chǎn)物，防止污染。
向離心柱加入裂解產(chǎn)物630μl，8000轉(zhuǎn)離心1min，若離心機在生物安全柜之外，每次使用都需進行外表面消毒。更換新廢液收集管，要從離心機中小心取出離心柱，將上層離心柱轉(zhuǎn)移到新收集管中，繼續(xù)將剩余裂解產(chǎn)物630μl加入離心柱中，若樣本體積大于140μl時需重復此步驟，直到全部裂解產(chǎn)物都過柱離心，8000轉(zhuǎn)離心1min，小心將離心柱轉(zhuǎn)移到新的收集管中。
取500μl AW1加入離心柱中（注意，此處加樣操作時務必將移液器吸頭接觸離心柱內(nèi)壁緩慢加樣），8000轉(zhuǎn)離心1min。小心取出離心柱，更換新的收集管。
取500μl AW2加入離心柱中，14000轉(zhuǎn)離心3min，小心取出離心柱，更換新的離心柱上端收集管，置于離心機中使用大轉(zhuǎn)速離心1min，以確保將AW2中的殘液*離心干凈。
取無菌1.5mlEP管收集核酸，將離心柱上端小心放入1.5mlEP管中，取40-60μl的洗脫液AVE加入到離心柱中（注意：洗脫液應盡量全部覆蓋住離心柱膜），用EP管管蓋蓋住離心柱，使用無菌剪刀剪去原離心柱管蓋。
室溫靜止1min，將其放入離心機中8000轉(zhuǎn)離心1min，回收核酸。丟棄離心柱，EP管中即為獲取的提取核酸，做好標記與登記。
四、用儀器提取核酸
首先按照說明說準備*，將200μl滅活樣本添加到*中，根據(jù)核酸提取儀的設置程序上機提取核酸，等儀器操作結(jié)束，提取核酸完成，回收核酸。
五、PCR體系配置
根據(jù)檢測樣本數(shù)量配制體系，將配制好的PCR體系充分混勻并離心后，將其通過傳遞窗送至樣本處理核酸加樣區(qū)，或單獨的樣本加樣實驗室。按照每孔分裝20μL反應體系，進行分裝，在各孔分別加入5μL待測樣本核酸或陰陽對照物（請注意每次檢測器包含1個陽性對照和3個陰性對照且陰性對照需隨機分布），密封PCR管，有條件時模板加樣盡量在單獨的生物安全柜進行。
工作人員將配好的PCR管通過傳送窗口送至PCR擴增區(qū)，或由人送至PCR擴增實驗室，上機檢測。
六、核酸PCR實驗室檢測上機檢測及結(jié)果分析
工作人員進入基因擴增分析實驗室，從傳遞窗取出PCR反應管，上機前需混勻并離心反應體系，按試劑盒說明說設置擴增參數(shù)并分析判讀結(jié)果。分析結(jié)果時，嚴格閱讀說明說充分了解試劑盒靈敏度、方法學局限性等綜合判讀實驗結(jié)果。
為防止擴增污染，反應結(jié)束后的PCR擴增管嚴禁開蓋并裝入密封帶中裝入的垃圾桶中。
七、檢測后的消毒處理
樣本處理完成后，工作人員應用75%的酒精消毒處理外層手套并脫下外層手套，放入生物安全柜中的生物垃圾桶中。檢測完成后，生物安全柜臺面和地面應用0.5-1%的有效氯消毒劑或75%乙醇進行擦拭。將安全柜內(nèi)產(chǎn)生的醫(yī)療垃圾用三層垃圾袋密封，并將其放入垃圾桶中，垃圾袋上需標記醫(yī)療垃圾信息。實驗結(jié)束后，生物安全柜以及實驗室均要進行紫外燈照射消毒，時間至少30min。
實驗操作人員，應有他人用0.5-1%的有效氯消毒劑或75%乙醇對一次性*均勻噴霧消毒處理，而后脫去*將檢測科研垃圾放入制定垃圾桶中，工作人員在離開二級實驗室后，應在緩沖區(qū)或走廊按順序摘脫個人三級防護用品，首先應帶新的外層手套，摘掉護目鏡并置于75%乙醇中消毒，自上而下、自內(nèi)向外翻轉(zhuǎn)脫掉一次性，脫去外層手套，摘除、一次性帽子、脫一次性鞋套。脫掉手套，病毒均需進行高壓滅菌處理。高壓前后醫(yī)療垃圾嚴格區(qū)分。
病毒相關垃圾需在120度，30min條件進行濕熱高壓處理，以高壓試紙條變色為有效，而后作為普通醫(yī)療垃圾處理。
您感興趣的產(chǎn)品PRODUCTS YOU ARE INTERESTED IN
環(huán)保在線 設計制作，未經(jīng)允許翻錄必究 .? ? ?
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗證碼
