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吐露港（ToloBio）生物科技有限公司發(fā)現(xiàn) CRISPR-Cas12蛋白具備高效的“反式切割活性”，并基于該酶的優(yōu)勢研發(fā)了“福爾摩斯/HOLMES”核酸快速檢測平臺技術(shù)（one-Hour Low-cost Multipurpose highly Efficient System）。相比于傳統(tǒng)的分子診斷技術(shù)，基于CRISPR的HOLMES技術(shù)具備高靈敏、高特異、快速便捷等優(yōu)勢，被《Science》雜志譽(yù)為“下一代分子診斷技術(shù)”，在病原菌檢測、遺傳疾病篩查、精準(zhǔn)醫(yī)療等眾多領(lǐng)域有很大的應(yīng)用潛力。
Cas12a
HOLMES檢測平臺[1]
·Cas12a家族是一類由單個(gè)crRNA介導(dǎo)的核酸內(nèi)切酶
·在HOLMES核酸檢測系統(tǒng)中，Cas12a: crRNA: 靶標(biāo)DNA分子三元復(fù)合物的形成會激活Cas12a的反式剪切活性，可無差別的剪切反應(yīng)體系中的ssDNA分子，包括熒光標(biāo)記的ssDNA探針，從而產(chǎn)生大量的熒光信號，指示檢測結(jié)果為陽性
| 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 | 應(yīng)用 |
| LbCas12a(Cpf1) Nuclease | 100 pmol | 32108-01 | 不僅可用于體外dsDNA的特異剪切，也可用于靶標(biāo)核酸的快速檢測，詳見HOLMES核酸快檢技術(shù)[1] |
| 1000 pmol | 32108-03 |
Cas12b
HOLMESv2檢測平臺[2]: 實(shí)現(xiàn)“一管法”和“絕對定量”
·采用嗜熱菌來源的Cas12b，比Cas12a更加耐熱，使核酸擴(kuò)增與靶標(biāo)檢測在同一管中進(jìn)行
·Cas12b: crRNA: 靶標(biāo)DNA三元復(fù)合物會激活Cas12b的反式剪切活性, 可無差別剪切反應(yīng)中的ssDNA分子，包括熒光標(biāo)記的ssDNA探針，從而產(chǎn)生大量的熒光信號，指示檢測結(jié)果為陽性
·“一管法”體系既能保持對SNP和甲基化位點(diǎn)的分辨能力，又有效地避免氣溶膠污染的風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)縮短檢測耗時(shí)
·通過結(jié)合HOLMESv2與digital PCR體系，可實(shí)現(xiàn)對靶標(biāo)核酸的絕對定量
| 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 | 應(yīng)用 |
| AapCas12b(C2c1) Nuclease | 100 pmol | 32118-01 | 最佳反應(yīng)溫度為60℃，可與LAMP恒溫?cái)U(kuò)增聯(lián)用，實(shí)現(xiàn)一步法CRISPR檢測體系，詳見HOLMESv2核酸快檢技術(shù)[2] |
| 1000 pmol | 32118-03 |
Cas13a
ToloBio擁有Cas12核酸檢測的方法學(xué)，并在2020年與美國科學(xué)院院士張鋒教授創(chuàng)立的Sherlock Biosciences就Cas12和Cas13診斷技術(shù)達(dá)成了中美市場的“交叉授權(quán)”合作。2022年11月，雙方又進(jìn)一步簽署了全球范圍內(nèi)的CRISPR診斷“交叉授權(quán)”合作協(xié)議，完成了ToloBio在CRISPR檢測領(lǐng)域方法學(xué)的全面布局。
HOLMES與SHERLOCK“雙劍合璧”[3]
·Cas13家族是一類由crRNA單獨(dú)介導(dǎo)的核酸內(nèi)切酶，可特異地識別并剪切靶標(biāo)ssRNA
·Cas13與crRNA、靶標(biāo)RNA形成三元復(fù)合物后，激活針對非特異序列ssRNA的“反式剪切活性”，將體系中的ssRNA切碎
·靶標(biāo)RNA濃度越高，體系反式剪切ssRNA報(bào)告探針的速度更快，釋放熒光信號到達(dá)平臺期的時(shí)間越短
| 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 | 應(yīng)用 | |
| LwaCas13a(C2c2) Nuclease | 100 pmol | 32117-01 | 反式剪切RNA報(bào)告探針，可用于開發(fā)靶標(biāo)核酸的快速檢測試劑盒 |
|
| 1000 pmol | 32117-03 |
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| 貨號 | 產(chǎn)品 | 規(guī)格 |
| JY0209 | 雙標(biāo)試紙條條（彩虹型） | 50T |
| JY0307 | Tiosbio® CRISPR單酶切及擴(kuò)增產(chǎn)物檢測試紙條 | 50T |
| JY0301 | Cas12/13專用檢測試紙條 | 50T |
| JY0308 | Tiosbio® CRISPR雙酶切試紙條條（變色龍） | 50T |
| WLB8201KIT | DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（基礎(chǔ)型） | 48T |
| WLE8202KIT | DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（熒光型） | 48T |
| WLN8203KIT | DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（膠體金試紙條型） | 48T |
| WLRB8204KIT | RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（基礎(chǔ)型） | 48T |
| WLRE8205KIT | RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（熒光型） | 48T |
| WLRN8206KIT | RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（膠體金試紙條型） | 48T |
| WLB5001 | DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（液體基礎(chǔ)型） | 100T |
| WLN5002 | DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（液體膠體金型） | 100T |
| WLR5003 | DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（液體熒光型） | 100T |
| WLRB5001 | RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（液體基礎(chǔ)型） | 100T |
| WLRN5002 | RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（液體膠體金型） | 100T |
| WLRE5003 | RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（液體熒光型） | 100T |
Cas12f
不同靶ssDNA存在時(shí)，Cas12f1行使高效反式剪切活性的熒光信號結(jié)果
·Cas12f核酸酶是依賴sgRNA介導(dǎo)的內(nèi)切核酸酶，傾向于特異結(jié)合并剪切靶標(biāo)ssDNA，且無需PAM位點(diǎn)
·Cas12f蛋白分子量普遍較小（約61.5kD），這是其主要優(yōu)勢之一
·與Cas12a/b功能類似，已有文獻(xiàn)報(bào)道，Cas12f對ssDNA靶標(biāo)中SNP位點(diǎn)的分辨能力高于Cas12[4]。
| 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 | 應(yīng)用 |
| Un1Cas12f1(Cas14a1) Nuclease | 100 pmol | 32119-01 | 與Cas12a/b功能類似，Cas12f也可用于靶標(biāo)核酸的快速檢測 |
| 1000 pmol | 32119-03 |
CRISPR-Dx的優(yōu)勢
·多重：聯(lián)檢/降本；微流控/盤式芯片；色碼CARMEN；體系多重
·絕對定量：液相微球/固態(tài)微孔
·超靈敏/特異：1-2個(gè)拷貝可測；識別PCR灰區(qū)、SNP位點(diǎn)、甲基化位點(diǎn)
·超快速：1-5min內(nèi)完成剪切；恒溫?cái)U(kuò)增；One-Step；免擴(kuò)增；免提取核酸
·POCT/全自動：LFA；LDT；全流程自動化；便捷/成本低
其他CRISPR-Dx產(chǎn)品
| 產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
| AsCas12a(Cpf1) | 32104-01 | 100 pmol |
| 32104-03 | 1000 pmol | |
| AacCas12b(C2c1) | 32116-01 | 100 pmol |
| 32116-03 | 1000 pmol | |
| FnCas12a(Cpf1) | 32106-01 | 100 pmol |
| 32106-03 | 1000 pmol | |
| Lb5Cas12a(Cpf1) | 32110-01 | 100 pmol |
| 32110-03 | 1000 pmol | |
| SpCas9 | 32101-01 | 100 pmol |
| 32101-03 | 1000 pmol | |
| Sp-dCas9 | 32102-01 | 100 pmol |
| 32102-03 | 1000 pmol |
Cas Protein表達(dá)質(zhì)粒
| 產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
| pET28TEV-AsCas12a | 92104 | 1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
| pET28TEV-AsCas12a-NLS | 92105 | 1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
| pET28TEV-FnCas12a | 92106 | 1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
| pET28TEV-FnCas12a-NLS | 92107 | 1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
| pET28TEV-LbCas12a | 92108 | 1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
| pET28TEV-LbCas12a-NLS | 92109 | 1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
| pET28TEV-Lb5Cas12a | 92110 | 1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
| pET28TEV-BbCas12a | 92111 | 1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
| pET28TEV-BoCas12a | 92112 | 1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
| pET28TEV-HkCas12a | 92113 | 1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
| pET28TEV-OsCas12a | 92114 | 1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
| pET28TEV-TsCas12a | 92115 | 1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
| pET28TEV-AacCas12b | 92116 | 1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
| pET28TEV-LwaCas13a | 92117 | 1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
| pET28TEV-AapCas12b | 92118 | 1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
| pET28TEV-Un1Cas12f1 (Cas14a1) | 92119 | 1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
| pET28TEV-Lb4Cas12a | 92120 | 1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
CRSIPR體系反式剪切報(bào)告探針
| 品名 | 貨號 | 規(guī)格 |
| HOLMES ssDNA reporter (FAM) | 31101 | 10 nmol powder |
| HOLMES ssRNA reporter (FAM) | 31111 | 10 nmol powder |
Reference:
[1] Li S, Cheng Q, Wang J, et al. CRISPR-Cas12a-assisted nucleic acid detection[J]. Cell Discovery. 2018, 4: 20.
[2] Li L, Li S, Wu N, et al. HOLMESv2: A CRISPR-Cas12b-Assisted Platform for Nucleic Acid Detection and DNA Methylation Quantitation[J]. ACS Synthetic Biology. 2019, 8(10): 2228-2237.
[3] Gootenberg JS, Abudayyeh OO, Lee JW, et al. Nucleic acid detection with CRISPR-Cas13a/C2c2. Science. 2017;356(6336):438-442.
[4] Harrington LB, Burstein D, Chen JS, et al. Programmed DNA destruction by miniature CRISPR-Cas14 enzymes. Science. 2018;362(6416):839-842.
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