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產(chǎn)品信息
貨號 | 名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
wb30310-25ku | Benzonase Nuclease 全能核酸酶 | 25KU | 980 |
wb30310-50ku | Benzonase Nuclease 全能核酸酶 | 50 KU | 1600 |
wb30310-100ku | Benzonase Nuclease 全能核酸酶 | 100 KU | 2800 |
wb30310-200ku | Benzonase Nuclease 全能核酸酶 | 200 KU | 5000 |
產(chǎn)品簡介：
本產(chǎn)品由經(jīng)基因工程改造的真核生物酵母菌表達(dá)純化所得，不含原核生物表達(dá)體系自身的細(xì)菌內(nèi)毒素，不僅應(yīng)用在科研研究中，作為培養(yǎng)細(xì)胞上清和細(xì)胞裂解液去粘度的酶制劑，去除核酸干擾提高后續(xù)蛋白純化或功能研究；而且應(yīng)用在疫苗工業(yè)、蛋白和多糖類制藥工業(yè)，去除宿主殘留核酸，大大降低疫苗和蛋白類產(chǎn)品核酸污染至皮克級別，提高制品生物功效。
本品以無菌液體酶的形式提供，儲存于緩沖液（20mM Tris-Cl pH8.0，2mM MgCl2，2mM NaCl，50%甘油）中，無色透明液體。
全能核酸酶作用條件
條件參數(shù) | 適條件 | 可作用條件 |
Mg2+ | 1-2 mM | 1-10 mM |
pH | 8.0-9.2 | 6.0-10.0 |
Temp | 37℃ | 0-42℃ |
DTT | 0-100 mM | >100 mM |
β-Mercaptoethanol | 0-100 mM | >100 mM |
Monovalent cation（Na+，K+） | 0-20 mM | 0-150 mM |
PO43- | 0-10 mM | 0-100 mM |
注：1）適條件為全能核酸酶釋放≥90%活力的條件，可作用條件為全能核酸酶釋放≥15%活力的條件；2）全能核酸酶活力定義為在37℃，pH 8.0反應(yīng)條件，2.625 mL反應(yīng)體系中，在30 min內(nèi)使△A260吸收值變化1.0（相當(dāng)于*消化37 μg鮭魚精DNA成為寡核苷酸）所用的酶量定義為一個(gè)活性單位（U）。
產(chǎn)品性質(zhì)
英文別名（English Synonym） | BenzNuclease; Universal Nuclease; Benzonase endonuclease |
CAS號（CAS NO.） | 9025-65-4 |
分子量（Molecular Weight） | 27.9 kDa |
純度（Purity） | ≥90%（SDS-PAGE） |
酶活（Enzyme Activity） | ≥250 U/μL |
比活（Specific Activity） | ≥1.0×106 U/mg蛋白 |
蛋白酶（Protease） |
|
內(nèi)毒素（Endotoxin） | Undetected（鱟試劑法） |
適pH（Optimum pH） | 8.0（工作范圍 |
適溫度（Optimum Temperature） | 37℃（工作范圍0-42℃） |
輔助因子（Cofactor） | 1-10 mM Mg2+ |
儲存緩沖液（Storage Buffer） | 20 mM Tris-Cl pH8.0，2 mM MgCl2，2 mM NaCl，50%甘油 |
稀釋緩沖液（Dilution Buffer） | 20 mM Tris-Cl pH8.0，2 mM MgCl2，2 mM NaCl |
活性單位定義（Unit Definition） | 在37℃，pH 8.0反應(yīng)條件，2.625 mL反應(yīng)體系中，在30 min內(nèi)使△A260吸收值變化1.0（相當(dāng)于*消化37 μg鮭魚精DNA成為寡核苷酸）所用的酶量定義為一個(gè)活性單位（U）。 |
使用方法
1）細(xì)胞處理：a.貼壁細(xì)胞去除培養(yǎng)基，用PBS洗后，1 mL RIPA裂解液（或其他哺乳動物細(xì)胞裂解液）加10-20 uL全能核酸酶，室溫或冰上孵育5-30 min，收集裂解液，離心取上清即可進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)。
b.懸浮細(xì)胞離心收集后，在離心管中加1 mL RIPA裂解液（或其他哺乳動物細(xì)胞裂解液）加10-20 uL全能核酸酶，室溫或冰上孵育5-30 min，收集裂解液，離心取上清即可進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)。
2）組織樣品：將30-100 mg動物或者植物組織研磨充分后，加入100-200 uL裂解液，同時(shí)加入加5-10 uL全能核酸酶，室溫或冰上孵育5-30 min，收集裂解液，離心取上清即可進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)。
3）大腸桿菌或者其他細(xì)菌：細(xì)菌離心收集后，用裂解液裂解或者研磨破碎后，每1 mL加1-5 uL全能核酸酶，室溫孵育30 min，收集裂解液，離心取上清即可進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)。
注：若溶液為高鹽溶液，偏酸性或者偏堿性，含有較高濃度的去垢劑、變性劑，應(yīng)適當(dāng)增加酶量或孵育時(shí)間。
運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸。-20℃保存，有效期2年。若是打開包裝后并4℃放置超過一周，建議過濾除菌防止微生物污染。
注意事項(xiàng)
為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操
常見問題：
Q. 產(chǎn)品應(yīng)如何稀釋？
A：正常建議稀釋比例(終濃度)為1:1000-1:20000，其中時(shí)間、溫度、稀釋比例為影響反應(yīng)的正面因素。
Q. 產(chǎn)品能否可以減少用量？
A：如希望減少用量，可酌情提高反應(yīng)溫度或延長時(shí)間。
Q. 使用該產(chǎn)品進(jìn)行消化反應(yīng)的抑制因子有哪些？
A：在含有以下物質(zhì)的體系中，全能核酸酶的活性會降低50%或以上：>150 mM一價(jià)陽離子，>100 mM磷酸鹽，>100 mM硫酸銨，>100 mM鹽酸胍，>0.1% SDS，>1% Triton X-100，>1% Tween 20。
Q. 怎樣滅活全能核酸酶？如何去除？
A：采用EDTA螯合金屬離子會可逆地抑制全能核酸酶活性，條件會造成不可逆失活，例如100 mM NaOH，70℃處理30 min等。全能核酸酶可采用陰離子交換柱或氣相色譜法從目的產(chǎn)物中分離出去。
Q. 全能核酸酶與蛋白酶抑制劑混合物是否兼容？
A：全能核酸酶與不含EDTA的蛋白酶抑制劑混合物兼容。若含有EDTA且濃度>1 mM時(shí)，會抑制核酸酶活性，建議：如果必須加EDTA，按照2倍EDTA濃度補(bǔ)加Mg2+。
Q. 產(chǎn)品的用量是多少？
A：需要根據(jù)重懸菌體所需裂解液的體積來確定需要酶的量。若普通蛋白純化，則需要濃度為25 U/mL；核蛋白則需要100 U/mL；病毒表達(dá)蛋白純化需要濃度為12.5 U/mL；疫苗產(chǎn)品需要量為0.9-1.1 U/mL。
Q. 產(chǎn)品的穩(wěn)定性如何，如果不小心在室溫放置幾天后，酶活性會受到怎樣的影響？
A：室溫2-3天，對活力影響不大。
Q. 全能核酸酶能在尿素環(huán)境消化核酸嗎？
A：全能核酸酶在尿素濃度為6 M時(shí)活性先增加，隨著時(shí)間延長活性又有降低；在尿素為7 M時(shí)，全能核酸酶15分鐘后出現(xiàn)變性并失活。但是在酶失活前多數(shù)核酸已經(jīng)降解了。可通過提高全能核酸酶使用濃度補(bǔ)償7 M尿素的影響。
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