醛的快速，準(zhǔn)確測定對生物研究，食品工業(yè)，化學(xué)研究和環(huán)境污染監(jiān)測是重要的任務(wù)。很少有試劑或分析試劑盒可用于定量醛的量。現(xiàn)有的大多數(shù)醛測試方法大多基于乏味而昂貴的HPLC-MS或GC-MS分離。我們的Amplite™比色醛定量試劑盒使用專有的染料，該染料與醛反應(yīng)后會生成發(fā)色產(chǎn)物。該套件提供了一種靈敏的一步比色法，可以在100 µL的測定體積（10 µM；圖1）中檢測低至1納摩爾的醛?？梢砸苑奖愕?6孔或384孔微量滴定板形式進(jìn)行測定，無需任何分離步驟即可輕松實(shí)現(xiàn)自動化。

平臺

組件

協(xié)議范例

乍看上去

協(xié)議摘要

1. 準(zhǔn)備醛標(biāo)準(zhǔn)品和/或測試樣品（50 µL）

2. 加入2X AldeView™黃色工作溶液（50 µL）

3. 在室溫下孵育30至60分鐘

4. 監(jiān)控405或550 nm處的吸光度增加

重要說明
在開始實(shí)驗(yàn)之前，將所有套件組件解凍至室溫。分析溶液（組分B）潛在危險(xiǎn)。處理時(shí)請戴手套。

儲備溶液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

1.醛標(biāo)準(zhǔn)溶液（10 mM）：
將1 mL稀釋緩沖液（組分D）添加到醛標(biāo)準(zhǔn)溶液（組分C）的小瓶中，制成10 mM醛標(biāo)準(zhǔn)溶液。

配制標(biāo)準(zhǔn)溶液

為了方便起見，請使用我們的系列稀釋計(jì)

取10 mM醛標(biāo)準(zhǔn)溶液并進(jìn)行1:10稀釋以獲得1000 uM醛標(biāo)準(zhǔn)溶液（AS7）。然后進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋，以得到醛標(biāo)準(zhǔn)品（AS6-AS1）的其余連續(xù)稀釋液。

準(zhǔn)備工作溶液

將5 mL分析溶液（組分B）添加到AldeView™Yellow（組分A）瓶中，并充分混合。注意： 5 mL的2X AldeView™Yellow反應(yīng)混合物足以容納1個板。反應(yīng)混合物不穩(wěn)定。2小時(shí)內(nèi)使用。注意：  測定溶液（組分B）有潛在危險(xiǎn)。處理時(shí)請戴手套。

程序

表1.  白色/透明底部96孔微孔板中醛標(biāo)準(zhǔn)品和測試樣品的布局。AS =醛標(biāo)準(zhǔn)品（AS1-AS7，1至1000 µM），BL =空白對照，TS =測試樣品。

表2. 每個孔的試劑組成。

1. 根據(jù)表1和2中提供的布局，準(zhǔn)備醛標(biāo)準(zhǔn)品（AS），空白對照（BL）和測試樣品（TS）。對于384孔板，每孔使用25 µL試劑，而不是50 µL。注意： BSA和Tween 20都會干擾測定，樣品中使用的BSA和Tween 20含量應(yīng)少于0.001％。注意： 如果含醛的樣品來自酶反應(yīng)，例如1,6-果糖雙磷酸果糖和1,6-6-二磷酸果糖醛縮酶，則需要準(zhǔn)備50 µL的酶反應(yīng)（384孔板為25 µL）。在37°C下孵育酶反應(yīng)至少1小時(shí)。酶反應(yīng)的組成應(yīng)根據(jù)需要進(jìn)行優(yōu)化（例如，特定的酶反應(yīng)可能需要優(yōu)化的緩沖液系統(tǒng)）。在大多數(shù)情況下，如果您沒有優(yōu)化的酶緩沖液，稀釋緩沖液（組分D）也可以用于進(jìn)行酶反應(yīng)。
   

2. 在醛標(biāo)準(zhǔn)品，空白對照和測試樣品的每個孔中添加50 µL AldeView™Yellow工作溶液，以使總?cè)y定體積為100 µL /孔。對于384孔板，向每個孔中添加25 µL AldeView™Yellow工作溶液，總體積為50 µL /孔。
   

3. 在避光的條件下，將反應(yīng)混合物在室溫下孵育30至60分鐘。
   

4. 用吸光度板讀數(shù)器在405或550 nm處監(jiān)測吸光度的增加。注意：使用AldeView™Yellow，不同濃度的醛可能會形成不同的顏色。在較低濃度下，在405 nm處的吸光度可獲得好結(jié)果。但是，在較高濃度下，吸光度傾向于移至550 nm。

數(shù)據(jù)分析

0.11e-210010- Dose-ResponseData legendGenerated with Quest Graph™Aldehyde (uM)OD 405 nmHover mouse to interact

從空白標(biāo)準(zhǔn)孔獲得的讀數(shù)（OD 405 nm）用作陰性對照。從其他標(biāo)準(zhǔn)的讀數(shù)中減去該值即可得到基線校正值。然后，繪制標(biāo)準(zhǔn)讀數(shù)，以獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線和方程式。該方程式可用于計(jì)算醛樣品。我們建議您使用在線線性回歸計(jì)算器

產(chǎn)品系列