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近年來，源自細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化的醛的形成，反應(yīng)性和毒性受到了極大的關(guān)注。醛的快速準(zhǔn)確測量是生物學(xué)研究，化學(xué)研究，食品工業(yè)和環(huán)境污染監(jiān)測的重要任務(wù)。有幾種試劑或測定試劑盒可用于定量醛的數(shù)量?，F(xiàn)有的大多數(shù)醛測試方法都基于通過繁瑣而昂貴的HPLC-MS或GC-MS進(jìn)行的分離。我們的Amplite™比色醛定量試劑盒（10051）和Amplite™熒光醛定量試劑盒（10052）均用于定量較高pH下的醛。試劑盒10052使用專有的熒光染料，該染料與醛反應(yīng)后會產(chǎn)生強熒光產(chǎn)物。試劑盒10052比試劑盒10051靈敏得多。該熒光試劑盒提供了靈敏的混合讀取方法，可在100 µL的測定體積（1 µM）中檢測低至0.1納摩爾的醛。該測定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進(jìn)行，無需分離步驟即可輕松實現(xiàn)自動化。熒光酶標(biāo)儀可輕松讀取其信號。
| 熒光酶標(biāo)儀 | |
| 激發(fā) | 365 |
| 發(fā)射 | 435 |
| 隔斷 | 420 |
| 推薦板 | 純黑色 |
| 組件A：AldeLight™藍(lán)色 | 1個小瓶 |
| 組分B：測定緩沖液 | 1瓶（30毫升） |
| 組分C：反應(yīng)緩沖液 | 1小瓶（6毫升） |
| 成分D：醛標(biāo)準(zhǔn) | 1個小瓶 |
| 成分E：DMSO | 1小瓶（100 µL） |
協(xié)議摘要
- 準(zhǔn)備醛標(biāo)準(zhǔn)品和/或測試樣品（50 µL）
- 添加AldeLight™Blue工作溶液（50 µL）
- 在室溫下孵育15至30分鐘
- 加入25 µL反應(yīng)緩沖液
- 監(jiān)測Ex / Em = 365/435 nm時的熒光增加
重要說明
在開始實驗之前，將所有套件組件解凍至室溫。
儲備溶液的制備
除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1. AldeLight™藍(lán)色儲備溶液（250X）：
將40 µL DMSO（組分E）加入小瓶AldeLight™藍(lán)色（組分A）中，制成250X AldeLight™藍(lán)色儲備溶液。
2.醛標(biāo)準(zhǔn)溶液（10 mM）：
將1 mL測定緩沖液（組分B）添加到醛標(biāo)準(zhǔn)溶液（組分D）小瓶中，制成10 mM醛標(biāo)準(zhǔn)溶液。
配制標(biāo)準(zhǔn)溶液
為了方便起見，請使用我們的系列稀釋計
取10 mM醛標(biāo)準(zhǔn)溶液并進(jìn)行1:10稀釋，以獲得1000 uM醛標(biāo)準(zhǔn)溶液（AS7）。然后進(jìn)行1：3系列稀釋，以得到剩余的醛標(biāo)準(zhǔn)品（AS6-AS1）。
準(zhǔn)備工作溶液
將20μL250X AldeLight™Blue儲備溶液添加到5 mL的測定緩沖液（組分B）中，并充分混合以制成AldeLight™Blue工作溶液。注意： 5 mL AldeLight™Blue工作溶液足以裝滿一塊板。反應(yīng)混合物不穩(wěn)定，在2小時內(nèi)使用。
程序
表1. 黑色96孔微孔板中醛標(biāo)準(zhǔn)品和測試樣品的布局。AS =醛標(biāo)準(zhǔn)品（AS1-AS7，1至1000 µM）；BL =空白對照；TS =測試樣品。
| BL | BL | TS | TS |
| AS1 | AS1 | ... | ... |
| AS2 | AS2 | ... | ... |
| AS3 | AS3 | ||
| AS4 | AS4 | ||
| AS5 | AS5 | ||
| AS6 | AS6 | ||
| AS7 | AS7 |
表2. 每個孔的試劑組成。
| 好 | 體積 | 試劑 |
| AS1-AS7 | 50微升 | 連續(xù)稀釋（1至1000 µM） |
| BL | 50微升 | 分析緩沖液（組分B） |
| TS | 50微升 | 測試樣本 |
- 根據(jù)表1和2中提供的布局，準(zhǔn)備醛標(biāo)準(zhǔn)品（AS），空白對照（BL）和測試樣品（TS）。對于384孔板，每孔使用25 µL試劑代替50 µL。
- 在醛標(biāo)準(zhǔn)品，空白對照和測試樣品的每個孔中添加50 µL AldeLight™Blue工作溶液，以使總?cè)y定體積為100 µL /孔。對于384孔板，向每個孔中添加25 µL AldeLight™Blue工作溶液，總體積為50 µL /孔。
- 在避光的條件下，將反應(yīng)混合物在室溫下孵育15至30分鐘。
- 在每個孔中加入25 µL反應(yīng)緩沖液（組分C）。
- 使用熒光板讀數(shù)器監(jiān)測Ex / Em = 365/435 nm處的熒光增加。
