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這種Live或Dead™細胞的活力使用兩種熒光指示劑：鈣黃綠素AM用于活細胞，而細胞不可滲透的DNA結(jié)合染料用于膜受損的細胞。鈣黃綠素AM是一種疏水性化合物，易于滲透完整的活細胞，并在被酯酶水解后變成強熒光。非熒光鈣黃綠素AM被細胞內(nèi)酯酶水解產(chǎn)生強烈熒光的親水鈣黃綠素，該鈣黃綠素被很好地保留在細胞質(zhì)中。酯酶活性與小瓶細胞的數(shù)量成正比。DNA結(jié)合染料對于具有完整膜的活細胞具有*的極性和不可滲透性。僅當結(jié)合死細胞的DNA時，它才發(fā)熒光。黑色壁板中生長的細胞可以在不到兩個小時的時間內(nèi)進行染色和定量。該測定法比其他可行性測定法更魯棒和準確。它可以很容易地適用于各種熒光平臺中的高通量檢測，例如微孔板檢測，免疫細胞化學(xué)和流式細胞儀。該試劑盒可提供所有必需成分，并具有優(yōu)化的測定方案。它適用于增殖和非增殖細胞，可用于懸浮細胞和貼壁細胞。該試劑盒以96孔的形式每孔使用100 ul試劑，可提供足夠的試劑來執(zhí)行100次測定。該試劑盒以384孔格式每孔使用25 ul試劑，可提供足夠的試劑來執(zhí)行400次測定。該試劑盒可提供所有必需成分，并具有優(yōu)化的測定方案。它適用于增殖和非增殖細胞，可用于懸浮細胞和貼壁細胞。該試劑盒以96孔的形式每孔使用100 ul試劑，可提供足夠的試劑來執(zhí)行100次測定。該試劑盒以384孔格式每孔使用25 ul試劑，可提供足夠的試劑來執(zhí)行400次測定。該試劑盒可提供所有必需成分，并具有優(yōu)化的測定方案。它適用于增殖和非增殖細胞，可用于懸浮細胞和貼壁細胞。該試劑盒以96孔的形式每孔使用100 ul試劑，可提供足夠的試劑來執(zhí)行100次測定。該試劑盒以384孔格式每孔使用25 ul試劑，可提供足夠的試劑來執(zhí)行400次測定。
平臺
| 流式細胞儀 | |
| 激發(fā) | 488 nm激光 |
| 發(fā)射 | 530/30 nm，610/20 nm濾光片 |
| 儀器規(guī)格 | FITC，PE-Texas Red頻道 |
| 熒光顯微鏡 | |
| 激發(fā) | FITC過濾器（帶電），TRITC過濾器（不帶電） |
| 發(fā)射 | FITC過濾器（帶電），TRITC過濾器（不帶電） |
| 推薦板 | 黑墻/透明底 |
| 熒光酶標儀 | |
| 激發(fā) | 490 nm（實況），540 nm（死角） |
| 發(fā)射 | 525 nm（實況），620 nm（死角） |
| 隔斷 | 515 nm，590 nm |
| 推薦板 | 純黑色 |
| 組分A：CytoCalcein™綠色 | 10小瓶，凍干 |
| 組分B：dian化丙啶 | 1小瓶（10 mM，200 µL） |
| 成分C：DMSO | 1小瓶（500 µL） |
| 組分D：測定緩沖液 | 1瓶（100毫升） |
用測試化合物準備細胞
加入相同體積的CytoCalcein™Green /dian化丙啶染料工作液（100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板）
在室溫或37°C下孵育1小時
監(jiān)測強度（底部讀取模式）下的熒光（Ex / Em = 490/525 nm（截止= 515 nm，實時）和540/620 nm（截止= 590 nm，無效），帶有FITC濾光片（實時）和TRITC濾光片的熒光顯微鏡（死）或帶有FL1和FL2通道的流式細胞儀
重要筆記
開始實驗之前，請在室溫下解凍每種試劑盒成分之一。
儲備溶液的制備
除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1. CytoCalcein™綠色原液：
將20 µL DMSO（組分C）添加到CytoCalcein™Green（組分A）小瓶中，并充分混合以制成CytoCalcein™Green原液。避光。注意：20 µL CytoCalcein™Green儲備溶液足以裝一板。為了存放，請將管子緊緊密封。
準備工作溶液
將全部含量（20 µL）的CytoCalcein™Green儲備溶液和20 µLdian化丙啶（組分B）添加到10 mL的測定緩沖液（組分C）中，并充分混合以制成CytoCalcein™Green /dian化丙啶染料工作液。CytoCalcein™Green /di化丙啶染料加工溶液在室溫下至少可穩(wěn)定2小時。 注意： 如果諸如CHO細胞之類的細胞含有會導(dǎo)致熒光染料隨時間滲漏的有機陰離子轉(zhuǎn)運蛋白，則應(yīng)制備binghuangshu儲備溶液并以zui終孔內(nèi)工作濃度范圍為1至1的濃度加入上樣緩沖液中。 2.5毫米 未使用的binghuangshu儲備溶液可保存在≤-20 oC.由于*染色條件可能會因細胞類型而異，因此建議分別確定組分A和B的適當濃度。
程序
使用讀板儀或熒光顯微鏡運行細胞活力測定：
根據(jù)需要用測試化合物處理細胞。注意：添加化合物之前不必洗滌細胞。但是，如果測試的化合物對血清敏感，則可以在添加化合物之前將生長培養(yǎng)基和血清因子吸掉。加入100 µL /孔/ 96孔板和25 µL /孔/ 384孔板的1X Hank鹽溶液和20 mM Hepes緩沖液（HHBS）或抽吸后選擇的緩沖液?；蛘?，細胞可以在無血清培養(yǎng)基中生長。
加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的CytoCalcein™Green /dian化丙啶染料工作液。
在避光的條件下，在室溫或37°C下孵育平板30分鐘至1小時。（孵育時間可能是15分鐘到過夜。孵育時間少于4小時，我們獲得了*結(jié)果）。注意：適當?shù)姆跤龝r間取決于所用的單個細胞類型和細胞濃度。優(yōu)化每個實驗的孵育時間。裝入后請勿洗滌細胞。對于非貼壁細胞，建議在孵育后以800 rpm的速度離心細胞板2分鐘，然后制動。
使用熒光板讀數(shù)器（底部讀取模式）在Ex / Em = 490/525 nm（截止= 515 nm，實時）和Ex / Em = 540/620 nm（截止= 590 nm，死）或熒光下監(jiān)測熒光強度帶FITC濾鏡的活細胞或TRITC濾鏡的死細胞顯微鏡。
用流式細胞儀進行細胞活力測定：
用測試化合物處理細胞所需的時間。
離心細胞以獲得1-5×10 5個細胞/管。
將細胞重懸于500 µL CytoCalcein™Green /dian化丙啶染料工作溶液中。
在避光條件下，于室溫或37°C孵育10至30分鐘。
可選：用HHBS或您選擇的緩沖液洗滌細胞。將細胞重懸于500 µL HHBS中，每管可得到1-5×10 5個細胞。
使用流式細胞儀在Ex / Em = 490/525 nm和Ex / Em = 490/620 nm（FL1和FL2通道）下監(jiān)測熒光強度。
22760 Live或Dead™細胞活力檢測試劑盒*綠色/紅色雙熒光* Live or Dead™ Cell Viability Assay Kit *Green/Red Dual Fluorescence* 1000 Tests $795 22770 Cell Meter™比色法CPK-8細胞定量試劑盒 Cell Meter™ Colorimetric CPK-8 Cell Quantification Kit 1000 Tests $195 22771 Cell Meter™比色法CPK-8細胞定量試劑盒 Cell Meter™ Colorimetric CPK-8 Cell Quantification Kit 5000 Tests $495 22779 Cell Meter™比色細胞細胞毒性檢測試劑盒 Cell Meter™ Colorimetric Cell Cytotoxicity Assay Kit 5000 Tests $795 22780 Cell Meter™比色法細胞毒性檢測試劑盒 Cell Meter™ Colorimetric Cell Cytotoxicity Assay Kit 1 kit $195 22781 Cell Meter™熒光法細胞毒性檢測試劑盒 Cell Meter™ Fluorimetric Cell Cytotoxicity Assay Kit 1 kit $195 22782 Cell Meter™熒光細胞細胞毒性檢測試劑盒 Cell Meter™ Fluorimetric Cell Cytotoxicity Assay Kit 5000 Tests $795 22783 Cell Meter™細胞活性檢測試劑盒*紅色熒光* Cell Meter™ Cell Viability Assay Kit *Red Fluorescence* 200 Tests $295
