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丙二醛（MDA）和4-羥基壬烯醛（4-HNE）是脂質(zhì)過(guò)氧化作用的天然副產(chǎn)物。作為脂質(zhì)過(guò)氧化的流行和可靠的生物標(biāo)志物，MDA已被廣泛用于確定臨床情況下的氧化應(yīng)激。因此，MDA的定量對(duì)于評(píng)估病理生理過(guò)程中的氧化應(yīng)激至關(guān)重要。Amplite™丙二醛熒光定量（MDA）定量試劑盒提供了一種快速方便的方法來(lái)測(cè)量MDA，而無(wú)需其他供應(yīng)商提供的商用MDA分析試劑盒所需的加熱步驟。Monoaldelite™Blue本身幾乎不發(fā)熒光，但與MDA反應(yīng)時(shí)會(huì)產(chǎn)生強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光。
| 熒光酶標(biāo)儀 | |
| 激發(fā) | 365納米 |
| 發(fā)射 | 435納米 |
| 隔斷 | 420納米 |
| 推薦板 | 純黑色 |
| 組分A：Monoaldelite™藍(lán)色 | 2瓶（凍干粉） |
| 組分B：測(cè)定緩沖液 | 1瓶（20毫升） |
| 組件C：MDA標(biāo)準(zhǔn) | 1小瓶（凍干粉） |
| 組分D：反應(yīng)溶液 | 1瓶（5毫升） |
| 成分E：DMSO | 1瓶（100 µL） |
準(zhǔn)備并添加MDA標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品（50 µL）
準(zhǔn)備并添加MDA工作溶液（50 µL）
在室溫下孵育10至30分鐘
添加反應(yīng)溶液（25 µL）
在室溫下孵育30至60分鐘
監(jiān)測(cè)Ex / Em = 365/435 nm的熒光強(qiáng)度
重要說(shuō)明
在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前，將所有套件組件解凍至室溫。
儲(chǔ)備溶液的制備
除非另有說(shuō)明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1. MDA標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 mM）：
將100 µL ddH 2 O加入MDA標(biāo)準(zhǔn)溶液（組分C）的樣品瓶中，制成100 mM MDA標(biāo)準(zhǔn)溶液。
2. Monoaldelite TM藍(lán)儲(chǔ)備溶液（250X）：
添加20 DMSO（成分E）為Monoaldelite的一個(gè)小瓶的μL TM 藍(lán)（成分A）使Monoaldelite TM 藍(lán)原液。注意：這種Monoaldelite TM Blue儲(chǔ)備液足以用于一個(gè)96孔板。它不穩(wěn)定，請(qǐng)及時(shí)使用。
配制標(biāo)準(zhǔn)溶液
為了方便起見(jiàn)，請(qǐng)使用我們的系列稀釋計(jì)
將10 µL 100 mM MDA標(biāo)準(zhǔn)溶液添加到990 µL化驗(yàn)緩沖液（組分B）中，以生成1000 µM MDA標(biāo)準(zhǔn)溶液（MDA7）。取1000 µM MDA標(biāo)準(zhǔn)溶液（MDA7）并進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋?zhuān)缘玫骄哂袦y(cè)定緩沖液（組分B）的系列稀釋MDA標(biāo)準(zhǔn)溶液（MDA6- MDA1）。
準(zhǔn)備工作溶液
Monoaldelite TM 藍(lán)工作溶液：
添加20 250X的μLMonoaldelite TM 藍(lán)儲(chǔ)備溶液到5 mL緩沖液（成分B），并將它們混合均勻。
程序
表1. 黑色96孔微孔板中MDA標(biāo)準(zhǔn)品和測(cè)試樣品的布局。MDA = MDA標(biāo)準(zhǔn)品（MDA1-MDA7，1.37至1000 µM），BL =空白對(duì)照，TS =測(cè)試樣品。
| BL | BL | TS | TS |
| MDA1 | MDA1 | ... | ... |
| MDA2 | MDA2 | ... | ... |
| MDA3 | MDA3 | ||
| MDA4 | MDA4 | ||
| MDA5 | MDA5 | ||
| MDA6 | MDA6 | ||
| MDA7 | MDA7 |
表2. 每個(gè)孔的試劑組成。
| 好 | 體積 | 試劑 |
| MDA1-MDA7 | 50微升 | 連續(xù)稀釋?zhuān)?.37至1000 µM） |
| BL | 50微升 | 分析緩沖液（組分B） |
| TS | 50微升 | 測(cè)試樣本 |
根據(jù)表1和2中提供的布局添加MDA標(biāo)準(zhǔn)品（MDA），空白對(duì)照（BL）和測(cè)試樣品（TS）。對(duì)于384孔板，每孔使用25 µL試劑，而不是50 µL。
將50 µL MDA工作溶液添加到MDA標(biāo)準(zhǔn)品，空白對(duì)照和測(cè)試樣品的每個(gè)孔中，以使總測(cè)定體積為100 µL /孔。對(duì)于384孔板，將25 µL MDA工作溶液添加到每個(gè)孔中，總體積為50 µL /孔。
將反應(yīng)在室溫下孵育10-30分鐘。
向每個(gè)孔中加入25 µL反應(yīng)溶液（組分D），使總測(cè)定體積為125 µL /孔。對(duì)于384孔板，將12.5 µL反應(yīng)溶液（組分D）加到每個(gè)孔中，總體積為62.5 µL /孔。
將反應(yīng)在室溫下孵育30-60分鐘。
使用熒光板讀數(shù)器在Ex / Em = 365/435 nm（截止= 420 nm）處監(jiān)視熒光增加。
10059 Amplite™比色法氨定量試劑盒*藍(lán)色* Amplite™ Colorimetric Ammonia Quantitation Kit *Blue Color* 200 Tests 10060 Amplite™熒光法guguanggantaiGSH/GSSG比率快速檢測(cè)試劑盒*綠色熒光* Amplite™ Rapid Fluorimetric Glutathione GSH/GSSG Ratio Assay Kit *Green Fluorescence* 200 Tests 10070 Amplite™比色法丙二醇（MDA）定量試劑盒 Amplite™ Colorimetric Malondialdehyde (MDA) Quantitation Kit 200 Tests
