會(huì)員.png)
6
快速進(jìn)行乙醇定量測(cè)量的能力在生命科學(xué)研究，臨床評(píng)估以及食品和藥品行業(yè)中非常需要。此非放射性乙醇測(cè)定法基于乙醇被氧化酶氧化的乙醇。該套件使用我們的Amplite™Red，使該套件可在熒光或比色讀數(shù)的雙重模式下記錄。該試劑盒可提供所有必需成分，并具有優(yōu)化的測(cè)定方案。該測(cè)定法堅(jiān)固耐用，靈敏，并且可以輕松適用于需要測(cè)量乙醇的多種應(yīng)用中的高通量測(cè)定法。該測(cè)定可以在30分鐘內(nèi)完成。
| 吸光度酶標(biāo)儀 | |
| 吸光度 | 576±5納米 |
| 推薦板 | 清除底部 |
| 熒光酶標(biāo)儀 | |
| 激發(fā) | 540納米 |
| 發(fā)射 | 590納米 |
| 隔斷 | 570納米 |
| 推薦板 | 純黑色 |
| 組分A：Amplite™乙醇試劑（光敏） | 1個(gè)小瓶 |
| 組分B：測(cè)定緩沖液 | 1瓶（10毫升） |
| 組分C：乙醇酶混合物（凍干） | 1個(gè)小瓶 |
| 成分D：DMSO | 1小瓶（200 µL） |
| 組分E：乙醇標(biāo)準(zhǔn) | （0.5毫升） |
準(zhǔn)備乙醇標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品（50 µL）
加入乙醇工作溶液（50 µL）
在室溫下孵育5-30分鐘
監(jiān)測(cè)Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）的熒光強(qiáng)度
重要說明
在開始實(shí)驗(yàn)之前，將所有套件組件解凍至室溫。
儲(chǔ)備溶液的制備
除非另有說明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1. Amplite™乙醇試劑儲(chǔ)備溶液（250X）：
將40 µL DMSO（組分D）添加到Amplite™乙醇試劑（組分A）小瓶中，制成250X Amplite™乙醇試劑儲(chǔ)備溶液。儲(chǔ)備溶液應(yīng)及時(shí)使用。注意：Amplite™乙醇試劑在存在硫醇（例如（DTT））的情況下不穩(wěn)定。反應(yīng)中DTT的終濃度應(yīng)不高于10 µM。Amplite™乙醇試劑在高pH（> 8.5）下也不穩(wěn)定。因此，反應(yīng)應(yīng)在pH 7 – 8下進(jìn)行。建議使用提供的測(cè)定緩沖液（pH 7.4）。
2.乙醇酶混合物（100X）：
將100 µL的測(cè)定緩沖液（組分B）添加到小瓶乙醇酶混合物（組分C）中，并充分混合以制成100X乙醇酶混合物。
配制標(biāo)準(zhǔn)溶液
為了方便起見，請(qǐng)使用我們的系列稀釋計(jì)
通過將適量的乙醇標(biāo)準(zhǔn)品（組分E）稀釋到H 2 O中以制備濃度為0％至0.1％的乙醇來制備乙醇標(biāo)準(zhǔn)品。包括0％的乙醇對(duì)照作為空白對(duì)照。乙醇的zui終濃度應(yīng)低兩倍（即0％至0.05％）。
準(zhǔn)備工作溶液
將20μL250X Amplite™乙醇試劑儲(chǔ)備溶液和50μL100X乙醇酶混合液加入5 mL分析緩沖液（組分B）中，制成乙醇工作溶液。
程序
表1. 固體黑色96孔微孔板中的乙醇標(biāo)準(zhǔn)品和測(cè)試樣品的布局。ES =乙醇標(biāo)準(zhǔn)品（ES1-ES7，0.0001％至0.1％），BL =空白對(duì)照，TS =測(cè)試樣品。
| BL | BL | TS | TS |
| ES1 | ES1 | ... | ... |
| ES2 | ES2 | ... | ... |
| ES3 | ES3 | ||
| ES4 | ES4 | ||
| ES5 | ES5 | ||
| ES6 | ES6 | ||
| ES7 | ES7 |
表2. 每個(gè)孔的試劑組成。
| 好 | 體積 | 試劑 |
| ES1-ES7 | 50微升 | 系列稀釋液（0.0001％至0.1％） |
| BL | 50微升 | 高氧2 |
| TS | 50微升 | 測(cè)試樣本 |
根據(jù)表1和2中提供的布局，準(zhǔn)備乙醇標(biāo)準(zhǔn)品（ES），空白對(duì)照（BL）和測(cè)試樣品（TS）。對(duì)于384孔板，每孔使用25 µL試劑代替50 µL。注意：由于Amplite™乙醇試劑過度氧化（變成非熒光產(chǎn)品），高濃度乙醇（例如終濃度0.5％）可能會(huì)導(dǎo)致熒光信號(hào)降低。
將50 µL乙醇工作溶液添加到乙醇標(biāo)準(zhǔn)品，空白對(duì)照和測(cè)試樣品的每個(gè)孔中，以使乙醇總測(cè)定體積為100 µL /孔。對(duì)于384孔板，向每個(gè)孔中添加25 µL乙醇工作溶液，總體積為50 µL /孔。
在避光條件下，于室溫下孵育反應(yīng)5至30分鐘。
使用熒光板讀數(shù)器在激發(fā)= 530-570 nm，發(fā)射= 590-600 nm（*Ex / Em = 540/590 nm），截止= 570 nm時(shí)監(jiān)控?zé)晒鈴?qiáng)度。注意：該板的內(nèi)容物也可以轉(zhuǎn)移到白色的透明底板上，并通過吸光度酶標(biāo)儀在576±5 nm的波長(zhǎng)下讀取。與熒光讀數(shù)相比，吸收檢測(cè)的靈敏度較低。
40001 Amplite™乙醇定量試劑盒 Amplite™ Ethanol Quantitation Kit 1 kit 40004 Amplite™比色法葡萄糖定量試劑盒 Amplite™ Colorimetric Glucose Quantitation Kit 500 Tests 40005 Amplite™熒光法葡萄糖定量試劑盒 Amplite™ Fluorimetric Glucose Quantitation Kit 500 Tests 40006 Amplite™danguchun定量試劑盒 Amplite™ Cholesterol Quantitation Kit 1 kit 40007 Amplite™danjian定量試劑盒 Amplite™ Choline Quantitation Kit 1 kit
