天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST），也稱(chēng)為血清guansuan草酰乙酸轉(zhuǎn)氨酶（GOT），是轉(zhuǎn)氨酶家族的成員。它催化天冬氨酸和guansuan之間α-氨基的可逆轉(zhuǎn)移，并且是氨基酸代謝中的重要酶。AST存在于許多身體組織中，例如肝臟，心臟，肌肉，腎臟，大腦。在健康受試者中，血清AST水平較低。但是，當(dāng)細(xì)胞受損時(shí)，例如急性和慢性肝炎，阻塞性黃疸，肝癌，心肌梗塞，AST可能會(huì)滲入血液，AST水平會(huì)顯著升高。因此，測(cè)定血清AST水平具有重要的臨床和診斷意義。Amplite™熒光天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）分析試劑盒提供了一種快速靈敏的方法來(lái)測(cè)量各種生物樣品中的AST。天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶催化天冬氨酸和α-酮戊二酸與草酰乙酸和guansuan的反應(yīng)。通過(guò)酶聯(lián)反應(yīng)循環(huán)產(chǎn)生紅色熒光產(chǎn)物來(lái)測(cè)量產(chǎn)物L(fēng)-guansuan。信號(hào)可以通過(guò)熒光酶標(biāo)儀讀取。借助Amplite™熒光天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定試劑盒，我們?cè)?00 µL反應(yīng)體積中僅檢測(cè)到2 mU / mL AST。該測(cè)定法是魯棒的，并且可以容易地適用于多種應(yīng)用。通過(guò)酶聯(lián)反應(yīng)循環(huán)產(chǎn)生紅色熒光產(chǎn)物來(lái)測(cè)量產(chǎn)物L(fēng)-guansuan。信號(hào)可以通過(guò)熒光酶標(biāo)儀讀取。借助Amplite™熒光天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定試劑盒，我們?cè)?00 µL反應(yīng)體積中僅檢測(cè)到2 mU / mL AST。該測(cè)定法是魯棒的，并且可以容易地適用于多種應(yīng)用。通過(guò)酶聯(lián)反應(yīng)循環(huán)產(chǎn)生紅色熒光產(chǎn)物來(lái)測(cè)量產(chǎn)物L(fēng)-guansuan。信號(hào)可以通過(guò)熒光酶標(biāo)儀讀取。借助Amplite™熒光天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定試劑盒，我們?cè)?00 µL反應(yīng)體積中僅檢測(cè)到2 mU / mL AST。該測(cè)定法是魯棒的，并且可以容易地適用于多種應(yīng)用。

1. 準(zhǔn)備AST標(biāo)準(zhǔn)液或測(cè)試樣品（50 µL）

2. 加入AST工作溶液（50 µL）

3. 在37°C下孵育20-30分鐘或在室溫下孵育60分鐘

4. 監(jiān)測(cè)Ex / Em = 540/590 nm時(shí)的熒光增加

重要說(shuō)明
在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前，在室溫下解凍A組分和B組分各一瓶。

儲(chǔ)備溶液的制備

除非另有說(shuō)明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

1. AST標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 U / mL）：
將100 µL DPBS緩沖液添加到AST陽(yáng)性對(duì)照（組分D）中，制成100 U / mL AST標(biāo)準(zhǔn)溶液。

配制標(biāo)準(zhǔn)溶液

為了方便起見(jiàn)，請(qǐng)使用我們的系列稀釋計(jì)

將3 µL 100 U / mL AST標(biāo)準(zhǔn)溶液加到含0.1％BSA的997 µL DPBS緩沖液中，以生成300 mU / mL AST標(biāo)準(zhǔn)溶液（AST7）。取300 µL 300 mU / mL AST標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋?zhuān)垣@得AST標(biāo)準(zhǔn)品（AST6- AST1）的連續(xù)稀釋液。注意： AST標(biāo)準(zhǔn)僅用于陽(yáng)性對(duì)照，不應(yīng)作為酶活性的定量標(biāo)準(zhǔn)。

準(zhǔn)備工作溶液

1. NAD溶液（100X）：
將100 µL ddH ₂ O加入NAD小瓶（組分C）。

2. AST酶混合物溶液：
將10 mL AST分析緩沖液（組分B）添加到AST酶混合物（組分A）瓶中，并充分混合。

3. AST工作溶液：
將整個(gè)小瓶的100X NAD溶液（從1開(kāi)始）添加到AST酶混合物溶液（從2開(kāi)始）中，以得到AST工作溶液。注意：此AST工作解決方案足以用于兩個(gè)96孔板。在室溫下不穩(wěn)定，應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)及時(shí)使用?；蛘撸梢酝ㄟ^(guò)將200 µL H ₂ O加入組分A的瓶子中制成50倍的AST酶混合物儲(chǔ)備溶液，然后通過(guò)將儲(chǔ)備溶液與測(cè)定緩沖液（組分B）和100X NAD混合來(lái)制備AST工作溶液。按比例求解。