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乳酸脫氫酶（LDH）是一種氧化還原酶，可催化丙酮酸和乳酸的相互轉(zhuǎn)化。LDH存在于包括動物和植物在內(nèi)的多種生物的細胞質(zhì)中。組織損傷或紅細胞溶血后，細胞將LDH釋放到血液中。由于LDH是一種相當穩(wěn)定的酶，它已被廣泛用于評估組織和細胞的損傷和毒性。LDH的定量分析具有廣泛的應(yīng)用。LDH在某些病理狀況（例如癌癥）中也會升高。該Amplite™乳酸脫氫酶測定試劑盒提供了一種基于熒光的方法，用于檢測血清，血漿，尿液以及細胞培養(yǎng)樣品等生物樣品中的L-乳酸脫氫酶（L-LDH）。在酶聯(lián)測定中，LDH與熒光性NADH傳感器專門監(jiān)測的NADH濃度成正比關(guān)系。該測定法對L-LDH是特異性的。熒光信號可以通過熒光酶標儀讀取。使用這種熒光Amplite™L-乳酸脫氫酶測定試劑盒，我們能夠在100 µL反應(yīng)體積中檢測到低至1 mU / mL L-乳酸脫氫酶。
平臺
| 吸光度酶標儀 | |
| 吸光度 | 575/605納米 |
| 推薦板 | 純白色 |
| 熒光酶標儀 | |
| 激發(fā) | 540納米 |
| 發(fā)射 | 590納米 |
| 隔斷 | 570納米 |
| 推薦板 | 純黑色 |
組件
| 組分A：酶探針 | 1瓶（凍干粉） |
| 組分B：測定緩沖液 | 1瓶（10毫升） |
| 成分C：NAD | 1個小瓶 |
| 成分D：L-LDH | 10 U /小瓶 |
協(xié)議范例
乍看上去
協(xié)議摘要
- 準備L-乳酸脫氫酶標準液或測試樣品（50 µL）
- 加入L-乳酸脫氫酶工作溶液（50 µL）
- 在室溫下孵育30分鐘-2小時
- 監(jiān)測Ex / Em = 540/590 nm時的熒光增加
重要說明
開始實驗之前，請在室溫下解凍每種試劑盒成分之一。
儲備溶液的制備
除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1. NAD儲備溶液（100X）：
將100 µL H 2 O加入NAD小瓶（組分C）中，制成100X NAD儲備溶液。
2. L-LDH標準溶液（100 U / mL）：
將100 µL H 2 O或1X PBS緩沖液加到L-LDH標準溶液（組分D）的小瓶中，制成100 U / mL L-LDH標準溶液。
配制標準溶液
為了方便起見，請使用我們的系列稀釋計
將10 µL L-LDH標準溶液加到990 µL 1X PBS緩沖液中，以生成1000 mU / mL L-LDH標準溶液。取1000 mU / mL L-LDH標準溶液進行1：3連續(xù)稀釋，以得到L-LDH標準溶液（L-LDH1- L-LDH7）的連續(xù)稀釋液。注意：稀釋的L-LDH標準溶液不穩(wěn)定，應(yīng)在4小時內(nèi)使用。
準備工作溶液
1.將10 mL測定緩沖液（組分B）添加到酶探針（組分A）瓶中，制成酶探針混合物。 注意： 此酶探針混合物足以用于兩個96孔板。
2.將50 µL NAD儲備溶液（100X）加入5 mL酶探針混合物中，并充分混合。 注意： 此L-LDH工作解決方案不穩(wěn)定，應(yīng)立即使用。
程序
表1.黑色96孔微孔板中L-LDH標準品和測試樣品的布局。L-LDH = L-LDH標準品（L-LDH1- L-LDH7，0.3至300 mU / mL）; BL =空白對照；TS =測試樣品。
| BL | BL | TS | TS |
| L-LDH1 | L-LDH1 | ... | ... |
| L-LDH2 | L-LDH2 | ... | ... |
| L-LDH3 | L-LDH3 | ||
| L-LDH4 | L-LDH4 | ||
| L-LDH5 | L-LDH5 | ||
| L-LDH6 | L-LDH6 | ||
| L-LDH7 | L-LDH7 |
表2.每個孔的試劑組成。
| 好 | 體積 | 試劑 |
| L-LDH1- L-LDH7 | 50微升 | 連續(xù)稀釋（0.3至300 mU / mL） |
| BL | 50微升 | 稀釋緩沖液 |
| TS | 50微升 | 測試樣品 |
- 根據(jù)表1和表2提供的布局，準備L-LDH標準品（L-LDH），空白對照（BL）和測試樣品（TS）。對于384孔板，每孔使用25 µL試劑代替50 µL。
- 在L-LDH標準品，空白對照和測試樣品的每個孔中加入50 µL L-LDH工作溶液，使總測定體積為100 µL /孔。對于384孔板，將25 µL工作溶液加入每個孔槽中，總體積為50 µL /孔。
- 在避光的條件下，將反應(yīng)在室溫下孵育30分鐘至2小時。
- 使用熒光板讀數(shù)器在激發(fā)= 530-570 nm，發(fā)射= 590-600 nm（*Ex / Em = 540/590 nm，在570 nm截止）下監(jiān)測熒光的增加。注意：該板的內(nèi)容，也可以在A的比例轉(zhuǎn)移至白色壁透明底的板和讀通過吸光度酶標儀575nm處 / A 605nm。但是，與熒光讀數(shù)相比，吸收檢測的靈敏度較低。
13813 Amplite™比色法L-乳酸脫氫酶（LDH）檢測試劑盒 Amplite™ Colorimetric L-Lactate Dehydrogenase (LDH) Assay Kit 200 Tests 13814 Amplite™熒光法L-乳酸檢測試劑盒 Amplite™ Fluorimetric L-Lactate Assay Kit 200 Tests 13815 Amplite™比色法L-乳酸檢測試劑盒 Amplite™ Colorimetric L-Lactate Assay Kit 200 Tests
