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我們的Cell Meter™檢測試劑盒是一套用于監(jiān)測細胞生存力的工具。有多種參數(shù)可用于監(jiān)測細胞活力。此特定試劑盒旨在通過測量活細胞中的通用胱天冬酶（胱天蛋白酶-1，-3，-4，-5，-6，-7，-8和-9）激活來監(jiān)測細胞凋亡。胱天蛋白酶激活被廣泛認為是細胞凋亡的可靠指標。大多數(shù)胱天蛋白酶具有對肽序列Val-Ala-Asp（VAD）的底物選擇性。該試劑盒使用TF2-VAD-FMK作為大多數(shù)半胱天冬酶活性的熒光指示劑。TF2-VAD-FMK是細胞可滲透的，無毒的，并且與凋亡細胞中活化的casepase-1，-3，-4，-5，-6，-7，-8和-9不可逆地結合。一旦與胱天蛋白酶結合，綠色熒光試劑將保留在細胞內(nèi)。結合事件阻止胱天蛋白酶進一步催化，但不會阻止凋亡的進行。在添加到培養(yǎng)基中后的15分鐘內(nèi)，該試劑將開始與活性的半胱天冬酶反應。該試劑盒可提供所有必需成分，并具有優(yōu)化的測定方案。它用于定量凋亡細胞中大多數(shù)激活的胱天蛋白酶活性，或用于篩選胱天蛋白酶抑制劑。綠色標簽允許通過流式細胞儀直接檢測凋亡細胞中激活的胱天蛋白酶?；蛴糜诤Y選胱天蛋白酶抑制劑。綠色標簽允許通過流式細胞儀直接檢測凋亡細胞中激活的胱天蛋白酶。或用于篩選胱天蛋白酶抑制劑。綠色標簽允許通過流式細胞儀直接檢測凋亡細胞中激活的胱天蛋白酶。
平臺
| 流式細胞儀 | |
| 激發(fā) | 488 nm激光 |
| 發(fā)射 | 530/30 nm濾光片 |
| 儀器規(guī)格 | FITC頻道 |
組件
| 組件A：500X TF2-VAD-FMK | 1小瓶（100 µL） |
| 組分B：測定緩沖液 | 1瓶（50毫升） |
組分C：500Xdian化丙啶 | 1小瓶（100 µL） |
用5×10 5到1×10 6細胞/ mL 的密度制備含測試化合物的細胞
將0.5 µL細胞溶液中加入1 µL 500X TF2-VAD-FMK
將細胞在37°C，5％CO 2 培養(yǎng)箱中孵育1-4小時
沉淀細胞并將細胞重懸于0.5 mL檢測緩沖液或生長培養(yǎng)基中
使用帶有530/30 nm濾光片的流式細胞儀（FITC通道）分析細胞
重要說明
開始實驗之前，請在室溫下解凍所有試劑盒組件。
對于每個樣品，在0.5 mL溫熱培養(yǎng)基或您選擇的緩沖液中以5×10 5至1×10 6細胞/ mL 的密度制備細胞。注意：應單獨評估每種細胞系，以確定誘導凋亡的*細胞密度。
用測試化合物處理細胞一段時間，以誘導細胞凋亡，并建立陽性和陰性對照。
向處理過的細胞中加入1 µL 500X TF2-VAD-FMK（組分A）。
將細胞在37°C，5％CO 2培養(yǎng)箱中孵育1-4小時。注意：對于貼壁細胞，用0.5 mM EDTA輕輕提起細胞以保持細胞完整，并在與TF2-VAD-FMK孵育之前用含血清的培養(yǎng)基洗滌細胞一次。合適的孵育時間取決于所用的單個細胞類型和細胞濃度。優(yōu)化每個實驗的孵育時間。
洗滌并旋轉(zhuǎn)細胞兩次。將細胞重懸于0.5 mL分析緩沖液（組分B）或生長培養(yǎng)基中。注意： TF2-VAD-FMK是熒光的；因此，重要的是洗凈任何未結合的試劑以除去背景。
如果需要，用DNA染色劑標記細胞（例如dian化丙啶或7-AAD標記死細胞）。
如果需要，修復細胞。
使用帶有530/30 nm濾光片的流式細胞儀（FITC通道）監(jiān)測熒光強度。在目標細胞上門，不包括碎片。
22822 Cell Meter™通用Caspase活性熒光法檢測試劑盒 *紅色熒光 適合于流式細胞檢測* Cell Meter™ Generic Fluorometric Caspase Activity Assay Kit *Red Fluorescence Optimized for Flow Cytometry* 1 kit 22823 Cell Meter™Caspase 3/7活性細胞凋亡檢測試劑盒 *綠色熒光 適合于流式細胞檢測* Cell Meter™ Caspase 3/7 Activity Apoptosis Assay Kit *Green Fluorescence Optimized for Flow Cytometry* 100 Tests
