1、Hypoxyprobe-1
Hypoxyprobe-1是2-硝基咪唑的替代物，其化學(xué)名和成分是Pimonidazole hydrochloride（Pimonidazole HCl），分子量為290.8，水溶性為400mM（=116 mg/ml），紫外吸收（324nm）的吸光系數(shù)為7020（0.9%生理鹽水）。
Hypoxyprobe-1的粉末和溶液形式皆具化學(xué)穩(wěn)定性。比如，固體形式的Hypoxyprobe-1于柔弱光線下室溫保存2年，UV和HPLC分析法評估無任何降解發(fā)生。溶于0.9%生理鹽水的Hypoxyprobe-1，濃度100g/L置于2-8℃保存4.5年，UV和HPLC分析法評估無任何降解發(fā)生。
作用機(jī)理：缺氧細(xì)胞中Pimonidazole被還原后得以活化。這一活化的中間物與蛋白質(zhì)、多肽和氨基酸中的巰基基團(tuán)（thiol groups）形成穩(wěn)定的加合物。Mab1抗體結(jié)合這些加合物從而能借由免疫化學(xué)法來檢測。
2、FITC-MAb1抗體
FITC-MAb1是熒光素偶聯(lián)的小鼠IgG1單克隆抗體（克隆4.3.11.3），濃度為0.5mg/ml（in PBS）。
感興趣組織可用免疫組化檢測（IHC），冰凍切片或者福爾馬林固定的石蠟包埋切片；也可組織降解后用流式分析法檢測；
3、anti-FITC HRP抗體
本抗體為偶聯(lián)到HRP的兔IgG多克隆抗體。用于檢測福爾馬林石蠟包埋的小鼠腫瘤組織，不僅有強(qiáng)熒光信號，且背景極其低。
使用指南：
1、Animal Studies 動物研究
研究正常或腫瘤組織缺氧首先通過靜脈注射（intravenous infusion）、腹腔注射（intraperitoneal injection）或口服（oral ingestion）法給Hypoxyprobe-1溶液，劑量為60mg/kg體重。比如，25g小鼠的探針用量為1.5mg/只小鼠。（高達(dá)400mg/kg的劑量用于小鼠無可見毒性或引起組織缺氧變化，但60mg/kg以*給予良好的染色結(jié)果）。
給藥后，Hypoxyprobe-1分布到包括大腦的所有組織，且僅僅在氧濃度≤14μM（相當(dāng)于pO2=10mm Hg，37℃）的細(xì)胞內(nèi)與蛋白質(zhì)巰基形成加合物。除了腫瘤之外，正常組織如肝臟、腎臟和皮膚含pO2等于或低于10mm Hg的細(xì)胞，也會結(jié)合Hypoxyprobe-1。
2、 Tissue cultures 組織培養(yǎng)
通常情況下，細(xì)胞懸液置于含100-200μM Hypoxyprobe-1的缺氧環(huán)境中孵育1-2h。之后細(xì)胞離心涂片、固定、FTIC-MAb1和anti-FITC chromogenic secondary染色。

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