免疫原

重組擬南芥LEA4-5: UniProt: Q9FG31, TAIR: AT5G06760, a group 4 LEA protein (Battaglia et al.， 2008)

主機(jī)的兔子

單克隆多克隆

親和純化的血清在PBS, ph7,4

格式凍干

量50µg

復(fù)配時，加入50µl無菌水

-20°C保存凍干/重組;一旦重組，使公平，以避免重復(fù)凍融循環(huán)，請記住，在打開之前，旋轉(zhuǎn)管短暫，以避免任何損失，凍干材料粘附在瓶蓋或管的兩側(cè)

Western blot (WB)  推薦稀釋倍數(shù)1:10 00 (WB)

預(yù)期|表觀MW

16 kDa

從擬南芥種子(提取物)中獲得蛋白提取物，并加入一定量的重組AtLEA4-5。提取緩沖液:0.7 M蔗糖，0.5 M Tris-base, 30 mM HCl, 50 mM EDTA, 0.1 M KCl, 2% β-巰基乙醇，12 mg/ml聚乙烯基聚吡咯烷酮(PVPP)。該緩沖液在提取前加入2mL的平衡benfen。樣品離心，蛋白質(zhì)相回收;提取的蛋白用0.1 m的乙酸銨溶解在甲醇中沉淀，離心，用冷(-20°C) 80%丙酮洗球。蛋白顆粒溶于SDS-增溶緩沖液(1% CHES, 2% SDS, 2% ?-巰基乙醇，10%甘油)。30 g種子蛋白提取物在95℃下用Laemmli緩沖液變性5 min，在15% SDS-PAGE上分離蛋白，在液體轉(zhuǎn)移系統(tǒng)中印跡1.5 h至硝化纖維素膜。用2%的脫脂牛奶在4°C的攪拌下阻斷印跡。用TBS漂洗后，印跡用一抗1:1 000稀釋(anti-AtLEA4-5)，在4°C攪拌3小時。倒出抗體溶液，簡單漂洗印跡，然后在TBS-T中4℃攪拌洗滌1次，15 min, 3次，5 min。然后，將二抗(抗兔IgG馬蘿卜過氧化物酶結(jié)合物)稀釋至1:25 000，攪拌RT加熱1h。用化學(xué)發(fā)光檢測試劑沖洗斑點(diǎn)2 min。曝光時間為30秒。