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產(chǎn)品描述
AapCas12b 核酸酶(又名 C2c1)是由 tracrRNA-crRNA(或 sgRNA)介導(dǎo)的 DNA 核酸內(nèi)切酶，在靶標(biāo)雙鏈 DNA 存在 PAM (TTN) 序列的情況下，特異地剪切靶標(biāo)雙鏈 DNA，使 DNA 雙鏈斷裂并生成粘性末端。而 AapCas12b 特異地剪切單鏈 DNA 靶標(biāo)不依賴 PAM 序列。此外，雙鏈或單鏈 DNA 靶標(biāo)均能激活 AapCas12b 的反式剪切活性(即旁路剪切活性/附屬剪切活性)，即當(dāng) AapCas12b 酶與 sgRNA、靶標(biāo) DNA 結(jié)合形成三元 復(fù)合物后，便會(huì)被激活針對(duì)非特異序列 ssDNA 的反式剪切活性，將體系中的任意序列 ssDNA 切碎。 AapCas12b 來(lái)源于嗜酸耐熱菌 Alicyclobacillus acidiphilus，zuijia剪切反應(yīng)溫度為 60℃，因此更適用于與 LAMP 聯(lián)用，開(kāi)發(fā)“一步法"恒溫?cái)U(kuò)增/CRISPR-Cas 檢測(cè)體系。
本產(chǎn)品將無(wú)甘油 AapCas12b 核酸酶凍干，可用于常溫運(yùn)輸及保存，使用配套的凍干 Cas 酶復(fù)溶液復(fù)溶 后，具有與本公司非凍干型 AapCas12b (C2c1) Nuclease（#32118）同等的反應(yīng)活性。本產(chǎn)品包括可用于單 個(gè)反應(yīng)的酶凍干粉及凍干球等多種凍干形態(tài)，滿足不同下游反應(yīng)體系構(gòu)建的需求。
產(chǎn)品組分
組分 | V32118T-01 | V32118T-02 |
| 48 T | 96 T |
AapCas12b Lyophilized Powder(8-TUBE STRIPS)· 單個(gè)反應(yīng)的凍干粉中AapCas12b含量為5 pmol，建議用于20 μL CRISPR反應(yīng)體系；
保存條件
本產(chǎn)品常溫保存及運(yùn)輸；復(fù)溶后于-20℃儲(chǔ)存，避免反復(fù)凍融。
實(shí)驗(yàn)流程
1.冰上制備如下除Cas酶外的CRISPR反式剪切反應(yīng)體系 mix：
組分 | 體積 | 終濃度 |
| 10 × HOLMES Buffer 1（#32005） | 2 μL | 1 × |
| 10 μM sgRNA | 0.5 μL | 250 μM |
| 1 μM Target DNA | 0.5 ~ 5 μL | 25 ~ 250 μM |
| 10 μM HOLMES ssDNA Reporter（#31101） | 0.5 μL | 250 μM |
| Nuclease-free Water | Up to 20 μL |
2.將上述 mix 20 μL混勻后加入單個(gè)反應(yīng)體系的凍干粉，使之溶解。
3.立即放入實(shí)時(shí)熒光定量 PCR儀檢測(cè)熒光信號(hào)，60℃反應(yīng)，每 30 sec采集一次熒光信號(hào)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
注意事項(xiàng)
2. 為防止 RNase 污染，請(qǐng)保持實(shí)驗(yàn)區(qū)干凈整潔，操作時(shí)需穿戴干凈的手套、口罩，實(shí)驗(yàn)所用槍頭、離心管等耗材均為 RNase-free。
3. 本產(chǎn)品僅包含 Cas 酶，CRISPR 反應(yīng)體系中所需的 Target DNA 和 crRNA 需要自己制備，10 × HOLMES Buffer 1 (#32005)和 10 μM HOLMES ssDNA Reporter (#31101)推薦從 TOLOBIO 選購(gòu)。
4. 復(fù)溶后的 AapCas12b 需在冰上配制反應(yīng)體系，且使用后立即將酶置于-20℃保存 (-20℃可保存一個(gè)月)。
5. 本產(chǎn)品僅供科研使用。
