雞白痢抗體檢測（PD）ELISA試劑盒是采用雙抗體一步來心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被雞白痢抗體檢測(PD)}捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的雞白痢抗體檢測(PD)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，計算樣品濃度。
雞白痢抗體檢測（PD）ELISA試劑盒標(biāo)本要求：
1、血清:將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時或4°C過夜,然后1000xg離心20分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?0°C或-80°C保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2、血漿:EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8C1000xg離心15分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20°C或80°C保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3、組織勻漿:用預(yù)冷的PBS(0.01M,pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果)，稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。Zui后將勻漿液于5000xg離心5~10分鐘，取上清檢測。注:標(biāo)本溶血會影響zui后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測。
