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伊萊博生物科技(上海)有限公司
主營產(chǎn)品: 動物行為學(xué)檢測,大中小型動物實(shí)驗(yàn),細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù) |

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更新時(shí)間:2023-10-30 15:20:57瀏覽次數(shù):1166
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穩(wěn)定細(xì)胞株的篩選 服務(wù)介紹
穩(wěn)定細(xì)胞系是指將外源DNA克隆到具有某種抗性的載體上,載體被轉(zhuǎn)染到宿主細(xì)胞并整合到染色體中,用載體中所含的抗性標(biāo)志進(jìn)行篩選,篩選得到可穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白,或者穩(wěn)定表達(dá)沉默特定基因的細(xì)胞株。常用物理方法(電轉(zhuǎn))、化學(xué)方法(脂質(zhì)體等)、生物方法(病毒)。
穩(wěn)定細(xì)胞株的篩選 實(shí)驗(yàn)原理
外源基因在細(xì)胞中的表達(dá)可分為兩大類,一類是瞬時(shí)表達(dá),一類是穩(wěn)定表達(dá)(又叫表達(dá))。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,雖然可以達(dá)到高水平的表達(dá),但通常只持續(xù)幾天。后者外源DNA整合到宿主細(xì)胞染色體上,使宿主細(xì)胞可長期表達(dá)目的基因。建立穩(wěn)定細(xì)胞株,一般是根據(jù)不同基因載體中所含有的抗性標(biāo)志選用相應(yīng)的藥物對靶細(xì)胞進(jìn)行篩選。常用的抗性標(biāo)記基因有潮霉素(hygromycin)、新霉素(neomycin)和嘌呤霉素(puromycin)。
實(shí)驗(yàn)流程:
1、載體構(gòu)建(表達(dá)質(zhì)粒載體、病毒載體);
2、轉(zhuǎn)染/感染;
3、目的蛋白初步檢測;
4、抗生素篩選;
5、目的蛋白再次檢測(定性/半定量);
6、單克隆細(xì)胞株穩(wěn)定性檢測。
客戶提供:培養(yǎng)好的細(xì)胞
公司提供:基本實(shí)驗(yàn)步驟、圖片、數(shù)據(jù)分析結(jié)果和穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株
實(shí)驗(yàn)周期:大約3-4月左右,具體需要根據(jù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)內(nèi)容而定。