可溶性酸性轉(zhuǎn)化酶(S-AI,Soluble Acid Invertase)是一種在高等植物中廣泛存在的酶,主要參與蔗糖代謝過程。它催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖,是植物糖類積累和利用的關(guān)鍵酶之一。
S-AI能夠催化蔗糖水解為葡萄糖和果糖,檢測其活性通常通過測定水解產(chǎn)物的生成量來實現(xiàn)。具體來說,S-AI催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖,這些還原糖進一步與特定的比色試劑(如3,5-二硝基水楊酸)反應(yīng)生成具有特征吸收光譜的化合物,通過測定該化合物的吸光度可以推導(dǎo)出S-AI的活性。
操作步驟:
準備反應(yīng)體系,加入適量的蔗糖作為底物和提取的酶溶液。在適宜的酸性條件下(pH 4.5~5.5)進行孵育,生成葡萄糖和果糖。通過加入比色試劑(如DNS試劑或3,5-二硝基水楊酸)檢測還原糖,生成有色化合物(如紅棕色或棕紅色氨基化合物)。在特定波長下(如540nm或510nm)測定吸光度,根據(jù)標準曲線計算糖的生成量,進而推導(dǎo)出S-AI活性。
優(yōu)點:操作簡便、成本低,適合實驗室常規(guī)檢測。
缺點:靈敏度較低,可能受到其他還原糖的干擾。