目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>生化檢測試劑盒>>土壤系列>> 肉桂酸4羥化酶（C4H）測試盒紫外分光光度法
| 貨號 | BK-01S6956 |
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特別提醒：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測。
產(chǎn)品名稱：肉桂酸4羥化酶（C4H）測試盒紫外分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣
檢測方法：紫外分光光度法
產(chǎn)品貨號：BK-01S6956
產(chǎn)品分類：其它系列
商品介紹：
測定意義: C4H又稱反式肉桂酸-4-單氧化酶，多存在于高等植物、酵母、菌類中，該酶催化肉桂酸羥化作用產(chǎn)生4-香豆酸鹽，是苯丙烷途徑中繼L-苯丙解氨酶之后的第二個關(guān)鍵酶。 測定原理： C4H催化肉桂酸和NADP生成4-香豆酸鹽和NADPH，在340nm下測定NADPH生成速率，即可反映C4H活性。 需自備的儀器和用品： 紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
所需的儀器和用品：
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的測定：
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗
樣本和試劑浪費！
1、樣本制備
① 組織樣本： 取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測液。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進行提取
| ② 細菌/細胞樣本： 先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照細菌/細胞數(shù)量（10 4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測；若渾濁，離心后取上清檢測。 |
實驗方法學：
一、肝素的配制：
市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集：
全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時，直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
吖啶黃素(5.0mg) Acridine flavin 5mg*5
100mg 5- 溴 -4- 氯 -3- -β-D- 半乳糖苷 X-gal(5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-Beta-D-Galactopyranoside) -20℃保存
500支 1.5 mL RNase-free 離心管 常溫
250 T 過氧化氫定量分析試劑盒（水兼容性） Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存
50mL Manganese Chloride Solution（溶液）,1M Manganese Chloride Solution,1M 常溫保存
0.5mL NTP溶液，10 mM NTP Solution，10 mM -20℃保存
2 ug pMAL- c4x pMAL- c4x 低溫運輸，-20℃保存
氣單胞菌添加劑 5支
1瓶 PC-12(未分化)細胞株 PC-12(未分化) 低溫運輸和保存
疊氮鈉葡萄糖肉湯 Azide Dextrose Broth 250g
25g 十六烷基基 CTAB(Cetyltrimethylammonium Bromide) 室溫干燥保存
肉桂酸4羥化酶（C4H）測試盒紫外分光光度法COMMD10 銅代謝結(jié)構(gòu)域蛋白10抗體 規(guī)格: 0.2ml
Complement C3b alpha' chain 補體C3b-α鏈抗體 規(guī)格: 0.1ml
CYP17 細胞色素P450 17抗體 規(guī)格: 0.1ml
Kilham Rat Virus/KRV-VP1/KRV-VP2 (C-terminus) 基爾曼氏細小毒VP1/VP2抗體(大鼠潛在毒KRV)C端 1ml
Mouse Anti-Goat IgG/Bio 標記的小鼠抗羊IgG 規(guī)格: 0.1ml
Ran/ARA24 雄激素受體相關(guān)蛋白24抗體 規(guī)格: 0.2ml
CHFR 泛素連接蛋白CHFR抗體 規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-human IgG/AP 堿性磷酸（AP）標記的羊抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml
FOXF1 叉蛋白F1抗體 規(guī)格: 0.2ml
CHORDC1 含半胱和組豐富域蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit anti-mouse Kappa light chain/AP 堿性磷酸（AP）標記的兔抗小鼠k鏈 規(guī)格: 0.1ml
VEGF-C 管內(nèi)皮生因子C型抗體 規(guī)格: 0.1ml
注意事項：
1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μl試劑二原液+60μl蒸餾水）。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管，對照管數(shù)值在什么范圍？
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是（1）試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應時間不夠，可以延長反應時間（反應時間30min可以延長到40min）。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測，通?？梢允箿y定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù)。
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