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目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>PCR試劑盒>>PCR檢測試劑盒>> 50次柯薩奇病毒型變種PCR檢測試劑盒說明書

柯薩奇病毒型變種PCR檢測試劑盒說明書
  • 柯薩奇病毒型變種PCR檢測試劑盒說明書
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  • 型號 50次
  • 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
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更新時間:2023-12-16 20:01:32瀏覽次數(shù):269評價

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技術(shù)原理:
 DNA的半保留復(fù)制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據(jù)堿基互補配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈式反應(yīng)實驗中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,當溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,并設(shè)計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。( DNA高溫變性低溫復(fù)性)
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,并逐步應(yīng)用于臨床。

注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

產(chǎn)品名稱

英文名稱

貨號

 柯薩奇病毒型變種PCR檢測試劑盒說明書

 Coxsackie Virus(CA24v)A24RTPCR

BK-P9040

原理是由一對引物介導(dǎo),能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
?
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。

C-型凝集素域家族11成員A(CLEC11A)重組蛋白英文名稱:Recombinant C-Type Lectin Domain Family 11, Member A (CLEC11A)

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HA標簽免疫親和介質(zhì)小鼠單核巨噬細胞白血病細胞

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延胡索乙素  Tetrahydropalmatine  355.4275分子量:C21H25NO4*:2934-97-6

2-溴喹啉  208.06  2- bromide*:2005-43-8分子量: C9H6BrN

1-乙-7-硝-1,2,3,4-四氫喹啉  206.24  1- ethyl -7- nitro -1,2,3,4- four*:57883-28-0分子量: C11H14N2O2

2-(2′-羥-4′-甲酸)-5氯-2H-并三唑    2- (2 '- -4' - hydroxy benzoic acid phenyl) -5 chloro -2H- benzo triazole three*:分子量:

 112.56  Chlorobenzene*:108-90-7分子量: C6H5Cl

紫蘇醛  Perilla aldehyde  150.22分子量:C10H14O*:18031-40-8

氯代正丁烷  Chlorinated butyl  92.57分子量: C4H9Cl*:109-69-3

2,2-雙二羥(Bis-tris)  2,2- double dimethylol aniline (Bis-tris)  209.24分子量: C8H19NO5*:6976-37-0

N,N-雙(2-羥乙)甘氨(Bicine)  N, N- bis (2- hydroxyethyl) glycine (Bicine)  163.17分子量: C6H13NO4*:150-25-4

紫云英苷  Astragalin  448.38分子量:C21H20O11*:480-10-4

 

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