1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在di一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在di一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘。
人臍帶血單個(gè)核細(xì)胞
小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（EGFP標(biāo)記）
人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（hMSCs）
人間充質(zhì)干細(xì)胞-脂肪
人間充質(zhì)干細(xì)胞-肝
人間充質(zhì)干細(xì)胞-臍帶
小鼠神經(jīng)干細(xì)胞
小鼠海馬神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞（EGFP標(biāo)記）
小鼠皮層神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞（EGFP標(biāo)記）
小鼠神經(jīng)干細(xì)胞（EGFP標(biāo)記）
人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞
人腦血管平滑肌細(xì)胞
人海馬神經(jīng)元
人少突膠質(zhì)細(xì)胞
人星形膠質(zhì)細(xì)胞
小鼠成纖維細(xì)胞（EGFP標(biāo)記）
mCF, 小鼠心臟成纖維細(xì)胞
MN-c, 小鼠皮質(zhì)神經(jīng)元
MN-h, 小鼠海馬神經(jīng)元
MSC, 小鼠雪旺細(xì)胞
MA, 小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞
MLF, 小鼠淋巴成纖維細(xì)胞
mRTEC, 小鼠腎小管上皮細(xì)胞
CSC, 小鼠心肌細(xì)胞
mEPC, 小鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞-骨髓
MEF, 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞
NSC，大鼠神經(jīng)干細(xì)胞
RN-h, 大鼠海馬趾神經(jīng)元
rEPC，大鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞-骨髓
RN-c, 大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元
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