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目錄:上海聯(lián)祖生物科技有限公司>>細胞生物試劑>>細胞凋亡與增殖>> 單寧含量測試盒(微量法)

單寧含量測試盒(微量法)
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具體成交價以合同協(xié)議為準
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更新時間:2022-07-11 16:45:32瀏覽次數(shù):1204評價

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貨號 LZ-01X8380
單寧含量測試盒(微量法)公司正在出售的產(chǎn)品:3,4-二氫嘧衍Monastrol(K-ATPase 抑制劑)間充質(zhì)干培養(yǎng)小鼠抗IgE受體抗體ELISA試劑盒,
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圖片1.png

公司產(chǎn)品僅供科研使用,下列是產(chǎn)品屬性:

產(chǎn)品名稱

英文名稱

規(guī)格

貨號

單寧含量測試盒(微量法)


100管/96樣

LZ-01X8380

商品介紹:

測定意義:

單寧是一類廣泛存在于植物體內(nèi)的多元酚化合物,又稱植物多酚。具有*的化學(xué)性質(zhì)和多種生理活性,如能與蛋白質(zhì)、生物堿、多糖結(jié)合;能與多種金屬離子發(fā)生絡(luò)合或靜電作用;具有止血、抑制微生物、抗過敏、抗突變、抗腫瘤、抗衰老等生理活性。

測定原理:

單寧在堿性環(huán)境下與磷鉬酸反應(yīng),生成藍色化合物,在760nm處有大吸收峰。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽和蒸餾水。
注意事項:

①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。

②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。

③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。

⑤洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。

⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。

⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。

⑧試劑應(yīng)按標簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄,不可保存。

⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

實驗步驟:

(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量

(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))

ALCAM Protein Rat 重組大鼠 ALCAM / CD166 蛋白 (His 標簽)

Actin Alpha /Alpha-SMA (Actin alpha , smooth muscle aorta 0.5mgActin Alpha /Alpha-SMA (Actin alpha , smooth muscle aorta) 肌動蛋白(抗原)

ENPP2重組小鼠 Autotaxin / ENPP2 / NPP2 蛋白 (His 標簽) Protein

FCGR3A Protein Human 重組人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Val, His 標簽)

ANTXR1重組人 ANTXR1 蛋白 (Fc 標簽) Protein

IL12B重組大鼠 IL12B / IL-12B 蛋白 (His 標簽) Protein

EGFL7(EGF-like domain containing protein 7 0.5mgEGFL7(EGF-like domain containing protein 7) 類表皮生長因子域7抗原

ITGA8 & ITGB1重組人 ITGA8 & ITGB1 Heterodimer 蛋白 Protein

NRG1 Protein Human 重組人 NRG1-alpha 蛋白 (ECD, Fc 標簽)

HPX Protein Mouse 重組小鼠 Hemopexin / HPX 蛋白 (His 標簽)

EGFL7(EGF-like domain containing protein 7 0.5mgEGFL7(EGF-like domain containing protein 7) 類表皮生長因子域7抗原

NRG1 Protein Human 重組人 NRG1-alpha 蛋白 (ECD, Fc 標簽)

IL12B重組大鼠 IL12B / IL-12B 蛋白 (His 標簽) Protein

HPX Protein Mouse 重組小鼠 Hemopexin / HPX 蛋白 (His 標簽)

ITGA8 & ITGB1重組人 ITGA8 & ITGB1 Heterodimer 蛋白 Protein

FCGR1 Protein Rat 重組大鼠 CD64 / FCGR1A 蛋白 (His 標簽)

Dickkopf相關(guān)蛋白2(DKK2)重組蛋白 Recombinant Dickkopf Related Protein 2 (DKK2)

IFNG重組小鼠 IFNG / Interferon Gamma 蛋白 (Fc 標簽) Protein

ANGPT4重組人 Angiopoietin 4 / ANG4 / ANGPT4 蛋白 (His 標簽) Protein

SCGN Protein Human 重組人 SCGN / Secretagogin 蛋白 (His 標簽)
單寧含量測試盒(微量法)dog IgG/RBITC 羅丹明標記狗IgG 0.3ml

LRRC15 英文名稱: 富含亮酸重復(fù)蛋白15抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Dnmt3 Beta DNA甲基轉(zhuǎn)移酶-3β抗體 規(guī)格 0.2ml

ACA-IgG(Mouse anti-cardiolipin antibody IgG) ELISA Kit 小鼠抗心磷脂抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 48T

赭曲霉A檢測試劑盒 96孔/盒 糧食作物(玉米、大米、豆類、花生、麥類等)、、飼料等

Anti-CK5/6 /FITC 熒光素標記細胞角蛋白5/6抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

操作程序:

注意:最重要的是及時固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC處理,以抑制RNA酶對mRNA的分解作用。此外,過度固定對原位雜交有明顯的不利影響。

1.玻片的處理:一般采用多聚賴氨酸或APES。切片厚度10-20μm。

2.細胞在多聚賴氨酸處理的蓋玻片上進行培養(yǎng),條件為37℃和5%的CO2,所用培養(yǎng)基為Dulbecco基礎(chǔ)培養(yǎng)基。細胞長好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分鐘×3次。

3.培養(yǎng)細胞和冰凍切片均可用下述方法固定:固定液為4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室溫固定 20--30分鐘。蒸餾水充分洗滌,干燥后-20℃冰凍可保存2周以上。

4.30%H2O2 1份+純甲醇50份混合,室溫處理30分鐘。蒸餾水洗滌3次。

5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%檸檬酸新鮮稀釋1ml 3% 檸檬酸加2滴濃縮型,混勻),37℃或室溫消化5—120秒鐘。有時也可以不消化。原位雜交用 PBS洗3次×5分鐘。蒸餾水洗1次。

6.后固定:消化后才需要。固定液為1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室溫固定 10分鐘。蒸餾水洗滌3次。

7.預(yù)雜交:濕盒的準備——干的雜交盒底部加20%甘油20ml以保持濕度。按每張切片20μι加預(yù)雜交液。恒溫箱38-42℃2—4小時。吸取多余液體,不洗。

8.雜交——按每張切片20μι雜交液,加在切片上。將原位雜交專用蓋玻片的保護膜揭開后,蓋在切片上。恒溫箱38-42℃雜交過夜(根據(jù)雜交情況可以調(diào)節(jié))。

9.雜交后洗滌:揭掉蓋玻片,37℃左右水溫的2×SSC洗滌5分鐘×2次;37℃0.5×SSC洗滌15分鐘×1次; 37℃0.2×SSC洗滌15分鐘×1次(如果有非特異性染色,重復(fù)0.2×SSC洗滌15分鐘×1-2次)。

10.滴加封閉液:37℃30分鐘。甩去多余液體,不洗

11.滴加化鼠抗*:37℃ 60分鐘或室溫120分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。

12.滴加SABC:37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×3次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。

13.滴加化過氧化物酶:37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。

14.DAB顯色:使用DAB顯色試劑盒—1ml蒸餾水加顯色劑A,B,C各一滴,混勻,加至標本上。一般顯色20-30分鐘。若無背景出現(xiàn)則可繼續(xù)顯色。也可自配DAB顯色劑后顯色。充分水洗。

15.必要時蘇木素復(fù)染,充分水洗。

16.酒精脫水,二甲苯透明,封片。

 


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