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注意事項：
盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存，并適當注意避免反復(fù)凍融。
如果有細菌或真菌污染，會嚴重影響檢測效果。
染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加。
如果細胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，導(dǎo)致染色失敗。
熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
用于流式細胞儀檢測時，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細胞。
需自備PBS。
本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
產(chǎn)品名稱：大鼠肝癌細胞
英文簡稱：McA-RH7777細胞
貨號：LZ-X969783
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁
我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌；部分產(chǎn)品現(xiàn)貨，公司產(chǎn)品僅用于科研超低比價，產(chǎn)品貨期短，價格優(yōu)，售后齊全。
凍存培養(yǎng)基：
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復(fù)蘇效果。
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低 1°C?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。
實驗材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個；
3、50ml離心筒2個
4、滅菌培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個
6、細胞計數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺；
鄰苯二甲酸二正辛酯新生牛血清動物糖蛋白酶解法N-糖基分解試劑盒
酮康唑特級馬血清 動物糖蛋白酶解法O-糖基分解試劑盒
恩諾沙星RPMI 1640，含D-葡萄糖、碳酸氫鈉、酮酸鈉、HEPES 和 L-谷氨酰動物糖蛋白酶解法非N非O糖基磷脂酰?。℅PI）分解試劑盒
慶大霉素硫酸鹽RPMI Medium 1640，含L-谷氨酰、酚紅，不含酮酸鈉、HEPES動物糖蛋白酶解法*糖基分解試劑盒
磺甲噁唑DMEM 高糖，含L-谷氨酰、酚紅，不含酮酸鈉、HEPES動物/組織胞漿超氧化物歧化酶（Cu/Zn SOD）分離試劑盒
甲氧芐啶DMEM 高糖，含L-谷氨酰、酚紅、酮酸鈉，不含HEPES 動物/組織甘露糖6-磷酸異構(gòu)酶（mannose－6－phosphate isomerase；MPI）電泳分析試劑盒
頭孢哌酮 DMEM (高)(H) (含酚紅 不含酮酸鈉) DMEM(H)(含雙抗，不含酮酸鈉)動物/組織高質(zhì)純化線粒體分離試劑盒
枯名DMEM (高)(H) (含酚紅 不含酮酸鈉) DMEM(H)(含雙抗，不含酮酸鈉)動物/組織活性線粒體分離試劑盒
苦瓜苷A DMEM(L)動物/組織亮氨酸氨基肽酶（leucine aminopeptidase；LAP）電泳分析試劑盒
異黃腐酚DMEM(L)動物/組織磷酸葡萄糖酸脫氫酶（phosphogluconate dehydrogenase；PGD）電泳分析試劑盒
酸氯倍他索RPMI Medium 1640動物/組織莽草酸脫氫酶（shikimate dehydrogenase；SkDH）電泳分析試劑盒
6-芐氨基嘌呤RPMI Medium 1640動物/組織葡萄糖6-磷酸異構(gòu)酶（glucose-6-phosphate isomerase；GPI）電泳分析試劑盒
鹽酸納洛酮MEM NEAA，含NEAA，L-谷氨酰，酚紅；不含HEPES，酮酸鈉動物/組織葡萄糖磷酸變位酶（phosphoglucomutase；PGM）電泳分析試劑盒
雌二DMEM（高）（H）（不含酚紅、谷氨酰、酮酸鈉）動物/組織色素C釋放比色法定量檢測試劑盒
氯霉素RPMI Medium 1640（不含酚紅、谷氨酰、酮酸鈉）動物/組織色素C釋放凋亡檢測試劑盒
McA-RH7777細胞整合素α3抗體蟲草素(標準品) ZSTK474；ZSTK-474
整合素β5抗體臭靈丹（標準品） Luteolin 7-O-glucuronide
整合素α1抗體臭梧桐葉（標準品） Ganetespib
白介素2受體β鏈抗體 IL-2Rβ川貝母（標準品） Lucidenic acid D
干擾素α2b抗體川陳皮素(標準品) DAPT (GSI-IX)
誘導(dǎo)協(xié)同激分子配體CD275抗體川燈心草（標準品） Lucidenic acid E
雞傳染性法氏囊病病抗體川楝素(標準品） Licofelone
白介素-17抗體川楝子（標準品） Ganoderenic acid C
5'肌苷磷脫氫酶2抗體川麥冬苷A Biocytin
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