細(xì)胞增殖測(cè)定是在細(xì)胞生物學(xué)和藥物發(fā)現(xiàn)研究中具有廣泛應(yīng)用價(jià)值的工具。它們通常用于評(píng)估正常細(xì)胞的健康狀況，對(duì)評(píng)估新型化療藥物的抗增殖效力和復(fù)合毒性至關(guān)重要。AAT Bioquest 提供了幾種評(píng)估細(xì)胞增殖的策略，這些策略基于跟蹤細(xì)胞分裂的世代或監(jiān)測(cè)細(xì)胞健康的關(guān)鍵參數(shù)，包括代謝活性、 DNA 合成或 ATP 濃度。從廣泛的傳統(tǒng)比色測(cè)定試劑中選擇用于確定細(xì)胞增殖的試劑，特別是四唑鹽，以及用于流式細(xì)胞術(shù)、成像和微孔板應(yīng)用的幾種高度敏感的基于熒光的測(cè)定方法。

一．細(xì)胞增殖的測(cè)定方法

測(cè)定細(xì)胞增殖準(zhǔn)確的方法是在 DNA 復(fù)制過程中通過 BrdU摻入來測(cè)定新合成的 DNA。盡管這種方法具有高度的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性，但由于隨后用熒光抗 BrdU 抗體進(jìn)行檢測(cè)是測(cè)量增殖所必需的，因此這種方法可能相當(dāng)繁瑣。或者，通過用 WST，resazurin 或細(xì)胞酯酶分離染料測(cè)量代謝活性的速率或用 CytoTellTM 染料或 CFSE 跟蹤細(xì)胞分裂的世代，可以更快地評(píng)估細(xì)胞增殖。最終，選擇適合的細(xì)胞增殖試驗(yàn)主要取決于細(xì)胞類型，研究方案，以及希望研究的作用機(jī)制。

二．DNA合成細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)

原位測(cè)定新合成的 DNA 是鑒定增殖細(xì)胞可靠、精確的方法。實(shí)現(xiàn)這一點(diǎn)的方法是在細(xì)胞周期的 S 期將 BrdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑 (17030)添加到新復(fù)制的 DNA 中。然后可以使用熒光標(biāo)記的抗 BrdU 抗體來測(cè)量增殖的 BrdU 標(biāo)記細(xì)胞。BrdU 染色適用于各種應(yīng)用，包括 IHC、 ICC 和 ELISA，并且可以用流式細(xì)胞術(shù)中適合的其他生物標(biāo)志物進(jìn)行染色。我們提供用 PE (V103305)標(biāo)記的小鼠單克隆抗 BrdU 抗體克隆 Bu20a 和未標(biāo)記的小鼠單克隆抗 BrdU 抗體克隆 Bu20a (V103300)和克隆 MoBu-1(V103295)的熒光綴合物，其可以用我們最亮和光穩(wěn)定的 iFluor系列染料標(biāo)記。

點(diǎn)擊-化學(xué)驅(qū)動(dòng)的 BucculiteTM XdU 細(xì)胞增殖測(cè)定

與 BrdU 測(cè)定不同，BucculiteTM XdU 細(xì)胞增殖測(cè)定不依賴于抗體來量化新生 DNA，也不需要 DNA 變性來促進(jìn) BrdU 標(biāo)記核苷的抗體檢測(cè)。相反，BucculiteTM XdU 細(xì)胞增殖測(cè)定使用含炔的胸苷類似物 XdU 的專有混合物，其摻入到新合成的 DNA 中，隨后通過銅催化的疊氮化物-炔環(huán)加成檢測(cè)(即單擊反應(yīng)，圖1)。

細(xì)胞增殖測(cè)定原理。在 XdU 存在下的增殖細(xì)胞在 S 期加入了胸腺嘧啶堿基的化合物。熒光標(biāo)記的疊氮化合物與摻入的 XdU 反應(yīng)，以便通過成像或流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)(圖在 BioRender 中制作)。

由于點(diǎn)擊反應(yīng)利用雙正交部分檢測(cè)增殖細(xì)胞，背景干擾是小的。更重要的是，由于反應(yīng)條件溫和，Bucculite^TM XdU 細(xì)胞增殖測(cè)定法保留了細(xì)胞形態(tài)，抗原結(jié)合位點(diǎn)和樣品完整性，為用戶提供了用細(xì)胞周期染料，針對(duì)細(xì)胞表面標(biāo)記物的抗體和熒光蛋白進(jìn)行多重分析的機(jī)會(huì)。在 XdU 摻入后，點(diǎn)擊反應(yīng)和隨后的洗滌步驟可以在60分鐘內(nèi)完成，并且新生 DNA 可以使用標(biāo)準(zhǔn)成像系統(tǒng)或流式細(xì)胞儀進(jìn)行定量。還提供環(huán)境安全的無銅 Bucculite^TM FdU 細(xì)胞增殖測(cè)定綠色，紅色和深紅色熒光。這些試劑盒利用我們的 Buccutte^TM 標(biāo)記化學(xué)，以促進(jìn)檢測(cè)新合成的 DNA 在活躍增殖的細(xì)胞。

用 Bucculite XdU 細(xì)胞增殖試驗(yàn)檢測(cè) IL 細(xì)胞增殖。使用 Bucculite XdU 細(xì)胞增殖 iFluor488成像試劑盒(22326)和 Bucculite XdU 細(xì)胞增殖 iFluor647成像試劑盒(22328)中提供的試劑和固定/檢測(cè)方案處理 HeLa 細(xì)胞。兩個(gè)樣本均用 Hoechst 33342核酸染色(17530)進(jìn)行復(fù)染，并用熒光顯微鏡成像。

表1.可用于流式細(xì)胞術(shù)和增殖實(shí)驗(yàn)的產(chǎn)品