百螢小課堂又給大家分享知識(shí)啦！今天給大家講解的內(nèi)容是關(guān)于細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)。
在生物學(xué)中，細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)是控制基本和復(fù)雜細(xì)胞過程的通信網(wǎng)絡(luò)。根據(jù)信號(hào)的性質(zhì)，它可以分為生物化學(xué)信號(hào)或機(jī)械信號(hào)。生化信號(hào)由蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、離子或激素等生化分子產(chǎn)生。對(duì)這些生化試劑的檢測(cè)可以揭示該特定類型信號(hào)傳導(dǎo)途徑的狀態(tài)。
信號(hào)網(wǎng)絡(luò)的破壞通常會(huì)導(dǎo)致癌癥、免疫疾病和代謝紊亂等疾病。通過了解信號(hào)通路，研究人員和臨床醫(yī)生也許能夠有效且高效的治療疾病。AAT Bioquest提供廣泛的檢測(cè)方法，對(duì)涉及細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)途徑的各種酶、蛋白質(zhì)或小分子進(jìn)行經(jīng)濟(jì)有效的分析。靈敏度和重現(xiàn)性測(cè)量磷酸化、甲基化和乙?；然钚?。
1.二磷酸腺苷檢測(cè)
二磷酸腺苷(ADP)是一種重要的有機(jī)分子，在細(xì)胞代謝中發(fā)揮著重要作用。它是 ATP 去磷酸化的產(chǎn)物，ATP 去磷酸化是活細(xì)胞中能量轉(zhuǎn)移所必需的關(guān)鍵反應(yīng)，并且可以通過再磷酸化再循環(huán)回 ATP。ADP 和 ATP 的這種相互轉(zhuǎn)化主要通過 ATP 酶(例如磷酸酶、磷酸化酶和激酶)在線粒體和葉綠體中發(fā)生。ADP 儲(chǔ)存在血小板內(nèi)的致密體中。當(dāng)血小板被激活時(shí)，ADP 被釋放，與嘌呤能受體家族相互作用，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞功能。
PhosphoWorks™ 熒光 ADP 測(cè)定提供了一種監(jiān)測(cè) ADP 形成的靈敏方法。在這種酶偶聯(lián)測(cè)定中，ADP 的形成是通過監(jiān)測(cè)激酶活性(由于它們的比例關(guān)系)來測(cè)量的。
圖1.ADP 劑量反應(yīng)通過 PhosphoWorks™ 熒光 ADP 檢測(cè)試劑盒(貨號(hào) 21655)在實(shí)心黑色 384 孔板中使用 Gemini 熒光酶標(biāo)儀(Molecular Devices)進(jìn)行測(cè)量。孵育 15、30 分鐘和 1 小時(shí)即可檢測(cè)低至 0.3 µM ADP(Z' 系數(shù) =0.65)。
表一.用于檢測(cè)ADP活性、形成或消耗的生化分析
2.三磷酸腺苷檢測(cè)
三磷酸腺苷(ATP)是一種復(fù)雜的有機(jī)分子，參與細(xì)胞能量生成、代謝調(diào)節(jié)和細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)。它作為主要能量存在于所有生物體中，并且在沒有活生物體的情況下會(huì)迅速降解。因此，ATP測(cè)定是一種有用的工具，可用于各種研究應(yīng)用，以識(shí)別活生物體。常見應(yīng)用包括細(xì)胞活力和細(xì)胞毒性、表面細(xì)菌的檢測(cè)、水中細(xì)菌的檢測(cè)、培養(yǎng)中的體細(xì)胞以及食品質(zhì)量和污染檢測(cè)等。
我們的PhosphoWorks發(fā)光法ATP檢測(cè)提供了一種快速、簡(jiǎn)單的生物發(fā)光法，可用于通過ATP檢測(cè)來確定哺乳動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞活力、細(xì)胞毒性和增殖。
圖2.使用PhosphoWorks發(fā)光法ATP檢測(cè)試劑盒(貨號(hào)21610)在96孔板上使用NOVOstar酶標(biāo)儀(BMG Labtech)檢測(cè)ATP計(jì)量反應(yīng)。
表二.用于檢測(cè)ATP活性、形成或消耗的試劑
3.cAMP檢測(cè)
(cAMP) 是許多生物途徑中重要的第二信使。它在許多生物體中用于細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，傳遞 cAMP 依賴性途徑，并參與蛋白激酶的激活和離子通道調(diào)節(jié)。cAMP 源自 ATP，由質(zhì)膜結(jié)合的腺苷酸環(huán)化酶合成，該酶與跨膜受體偶聯(lián)。腺苷酸環(huán)化酶的激活是由一系列信號(hào)分子啟動(dòng)的。這些分子與GPCR等受體相互作用，啟動(dòng)腺苷酸環(huán)化酶活性并增加細(xì)胞內(nèi) cAMP 水平。cAMP 激活 cAMP 依賴性蛋白激酶，負(fù)責(zé)磷酸化特定底物蛋白。cAMP 活性的測(cè)定可用于評(píng)估受體激活、受體表征和受體-配體鑒定的功能測(cè)定。
圖3.使用Screen Quest比色法ELISA cAMP檢測(cè)試劑盒(Cat#36370)在帶有SpectraMax酶標(biāo)儀的透明96孔板中檢測(cè)cAMP計(jì)量反應(yīng)。
表3.用于檢測(cè)G蛋白偶聯(lián)受體系統(tǒng)中腺苷酸環(huán)化酶活性
