產(chǎn)品基本信息

產(chǎn)品名稱：Portelite 熒光法RNA定量試劑盒

英文名稱：Portelite™ Fluorimetric RNA Quantitation Kit*Optimized for Cytocite™ and Qubit™ Fluorometers*

產(chǎn)品貨號：17658   17659

產(chǎn)品規(guī)格：100 Tests  500 Tests

儲存條件：保存在冰箱-15℃干燥

保質(zhì)期：12個月

檢測和定量少量 RNA 對于各種生物學(xué)應(yīng)用極為重要，例如在進(jìn)行 Northern 印跡分析、S1 核酸酶測定、RNase 保護(hù)測定、cDNA 文庫制備、逆轉(zhuǎn)錄之前測量體外轉(zhuǎn)錄 RNA 的產(chǎn)量和測量 RNA 濃度PCR、差異顯示PCR。測量核酸濃度常用的技術(shù)是測定 260 nm 處的吸光度。基于吸光度的方法受到蛋白質(zhì)、游離核苷酸和其他紫外線吸收化合物引起的干擾的限制。使用敏感且選擇性的熒光核酸染色劑可以緩解這種干擾問題。 StrandBrite™ RNA 定量試劑是一種超靈敏熒光核酸染色劑，用于定量溶液中的 RNA。 StrandBrite™ RNA 定量試劑可使用 CytoCite™ 或 Qubit™ 熒光計檢測低至 5 ng/mL 的 RNA。我們的 StrandBrite™ Green 熒光 RNA 定量試劑盒包括我們的 StrandBrite™ Green 核酸染色劑和優(yōu)化且穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)方案。它提供了一種定量溶液中 RNA 的便捷方法。

產(chǎn)品光譜圖

激發(fā)(納米)：509

發(fā)射(納米)：527

成分

實(shí)驗(yàn)方案

樣品分析方案

概述

準(zhǔn)備 StrandBrite RNA 工作溶液

將 190 µL StrandBrite™ RNA 工作溶液添加到每個 0.2 mL PCR 管中

將 10 µL RNA 標(biāo)準(zhǔn)品或測試樣品添加到每個管中

室溫孵育2分鐘

使用 CytoCite™ 或 Qubit™ 熒光計檢測熒光

注：在開始實(shí)驗(yàn)之前，將所有套件組件置于室溫下。 

溶液配制

StrandBrite™ RNA 工作溶液

將 StrandBrite Green（組分 A）在測定緩沖液（組分 B）中稀釋 200 倍。例如，要為 8 個樣品準(zhǔn)備足夠的工作溶液，請將 5 µL StrandBrite Green（組分 A）添加到 1 mL 測定緩沖液（組分 B）中。

注意 用箔紙覆蓋工作溶液或?qū)⑵渲糜诤诎堤?，以避光。我們建議在塑料容器而不是玻璃容器中制備該溶液，因?yàn)槿玖峡赡軙降讲ＡП砻?。為了獲得最佳效果，該溶液應(yīng)在制備后幾小時內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)方案

可接受的樣品體積范圍為 1~20 µL，具體取決于 RNA 樣品的估計濃度。推薦樣品體積為 10 µL，RNA 濃度在 0.01~10 ng/µL 范圍內(nèi)。如果使用其他樣品體積，請調(diào)整濃度計算中的稀釋系數(shù)。

以下實(shí)驗(yàn)方案是基于 10 µL 樣品體積、RNA 濃度在 0.01~10 ng/µL 范圍內(nèi)生成的。

1.將 190 µL StrandBrite Green 工作溶液添加到每個 CytoCite 樣品管 (#CCT100) 或等效的 0.2 mL PCR 管中。 注意 使用薄壁聚丙烯透明 0.2 mL PCR 管，例如#CCT100。

2.將 10 µL RNA 標(biāo)準(zhǔn)品 #1 和 #2 或測試樣品添加到每個管中，然后通過渦旋 2~3 秒進(jìn)行混合。

3.將所有管在室溫下孵育 2 分鐘。

4.將樣品插入 CytoCite™ 或 Quibit™ 并用綠色熒光通道檢測熒光。請遵循適用于 CytoCite™ 熒光計的程序。

標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)曲線的制備（可選）

對于 StrandBrite™ 檢測，您可以選擇使用 RNA 標(biāo)準(zhǔn)品制作校準(zhǔn)曲線。以下是生成定制 RNA 標(biāo)準(zhǔn)曲線的簡要方案：

1.使用 Assay Buffer 進(jìn)行 1/3 系列稀釋，使用 RNA Standard #2 獲得 10、3、1、0.3、0.1、0.03、0.01 和 0 ng/μL RNA 標(biāo)準(zhǔn)稀釋液。

2.將 190 µL StrandBrite™ Green 工作溶液添加到每個管中。

3.將 10 µL RNA 標(biāo)準(zhǔn)品或測試樣品加入每個管中，然后渦旋 2~3 秒進(jìn)行混合。

4.將反應(yīng)物在室溫下孵育 2 分鐘。

5.將樣品插入 CytoCite™ 并用綠色熒光通道檢測熒光。

產(chǎn)品實(shí)驗(yàn)圖

圖1。用 StrandBriteTM 綠色熒光 RNA 定量試劑盒生成 RNA 標(biāo)準(zhǔn)曲線。用綠色熒光通道定量熒光強(qiáng)度，用線性擬合法計算回歸模型。