花青染料通常表現(xiàn)出非常大的摩爾吸收率（約150000至300000M^-1 cm^-1）以及適度的量子產(chǎn)率，從而產(chǎn)生及其明亮的熒光信號。事實證明，花青在許多領(lǐng)域都非常有用，包括生物成像、細(xì)胞學(xué)、熒光技術(shù)和分析化學(xué)等，對于某些生物學(xué)應(yīng)用，花青可以有利地替代其他常規(guī)染料，它們也可以應(yīng)用在各種生物學(xué)。

常見的花青染料

花青染料中常使用的是發(fā)黃綠色熒光的Cy3(Ex:550nm,Em:570nm)和發(fā)紅色熒光的Cy5(Ex:650nm,Em:670nm)。由于它們具有少量光譜重疊，Cy3和Cy5通常組合為2色檢測。Cy3可通過各種熒光儀、成像儀器和具有TRITC標(biāo)準(zhǔn)濾波片的顯微鏡來檢測。由于Cy5消光系數(shù)高，它以成為遠(yuǎn)紅色熒光染料的流行替代品。

圖為Cy3(左)、Cy5(中)、Cy7(右)的激發(fā)和發(fā)射光譜

表一.花青染料的光譜特性

花青染料	激發(fā)光線(nm)	Ex/Em(nm)	濾波片組	消光系數(shù)	熒光量子產(chǎn)率
Cy3	532	554/568	Cy3/TRITC	150000	0.15
Cy5	633-647	650/669	Cy5	250000	0.27
Cy7	730	754/778	Cy7	250000	0.3

磺化與非磺化花青染料

磺化與非磺化花青染料具有非常相似的熒光特性，在許多應(yīng)用中可以互換使用。它們之間的差異主要在于溶解度?；腔臑樗苄?，非磺化的則為脂溶性。

表2.磺化與非磺化花青的比較

	Cy3		Cy5		Cy7
形式	磺化	非磺化	磺化	非磺化	磺化	非磺化
Ex/Em(nm)	554/568		650/669		754/778
濾波片組	Cy3/TRITC		Cy5		Cy7
消光系數(shù)	150000	140000	250000	230000	250000	250000
熒光量子產(chǎn)率	0.10	0.07	0.27	0.16	0.12	0.2

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色彩的科學(xué)：花青染料在熒光分析中的奇妙之旅

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