Cell Meter細(xì)胞內(nèi)熒光法過(guò)氧化氫檢測(cè)試劑盒  是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測(cè)過(guò)氧化物的試劑盒，過(guò)氧化氫 (H2O2) 是一種活性氧代謝副產(chǎn)物，是許多氧化應(yīng)激相關(guān)狀態(tài)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑。它參與了許多與哮喘、動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病血管病變、骨質(zhì)疏松癥、許多神經(jīng)退行性疾病和唐氏綜合癥有關(guān)的生物事件。也許過(guò)氧化氫生物學(xué)趣的方面是最近的報(bào)告，即抗體具有將分子氧轉(zhuǎn)化為過(guò)氧化氫的能力，有助于免疫系統(tǒng)的正常識(shí)別和破壞過(guò)程。這種活性物質(zhì)的測(cè)量將有助于確定氧化應(yīng)激如何調(diào)節(jié)不同的細(xì)胞內(nèi)途徑。該 Cell Meter 過(guò)氧化氫檢測(cè)試劑盒使用我們*的 OxiVision Green 過(guò)氧化氫探針來(lái)量化活細(xì)胞中的過(guò)氧化氫。 OxiVision Green 具有細(xì)胞滲透性，當(dāng)它與過(guò)氧化氫反應(yīng)時(shí)會(huì)產(chǎn)生綠色熒光。該試劑盒是一種優(yōu)化的“混合和讀取"分析格式，與 HTS 液體處理儀器兼容。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供的Cell Meter細(xì)胞內(nèi)熒光法過(guò)氧化氫檢測(cè)試劑盒 。

實(shí)驗(yàn)方案

96孔板的測(cè)定方案

概述

用于溶液測(cè)定

1.準(zhǔn)備H2O2反應(yīng)混合物（50μL）

2.加入H2O2標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品（50μL）

3.在室溫下孵育10-60分鐘

4.在Ex / Em = 490/525 nm （cutoff=515nm）處檢測(cè)熒光強(qiáng)度

注意：在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前，在室溫下解凍所有試劑盒組分。

用于活細(xì)胞檢測(cè)

1. 在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中制備細(xì)胞
2. 使用 OxiVision Green 過(guò)氧化氫探針工作溶液對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色并孵育
3. 用測(cè)試化合物處理細(xì)胞
4. 在 Ex/Em = 490/525 nm (Cutoff = 515nm) 處用底部讀取模式檢測(cè)熒光強(qiáng)度

溶液配制

1. OxiVision Green 過(guò)氧化氫探針儲(chǔ)備液 (250X)
將 50 μL DMSO（組分 D）加入 OxiVision Green 過(guò)氧化氫探針（組分 A）的小瓶中，制成 250X OxiVision Green 過(guò)氧化氫探針儲(chǔ)備液，注意避光。

2. H2O2 標(biāo)準(zhǔn)溶液（20 mM）
將 22.7 μL 的 3% H2O2（0.88 M，組分 B）加入 977 μL 的 Assay Buffer（組分 C）中，制成 20 mM H2O2 標(biāo)準(zhǔn)溶液。

注意 稀釋的 H2O2 標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定。 未使用的部分應(yīng)丟棄。

3.H2O2 標(biāo)準(zhǔn)
將 50 μL 20 mM H2O2 標(biāo)準(zhǔn)溶液加入 950 μL Assay Buffer（組分 C）中，得到 1000 μM H2O2 標(biāo)準(zhǔn)溶液。 取 1000 μM H2O2 標(biāo)準(zhǔn)溶液并進(jìn)行 1:3 的系列稀釋，以得到含有測(cè)定緩沖液（組分 C）的系列稀釋的 H2O2 標(biāo)準(zhǔn)品（HS1 - HS7）。

4.工作溶液配制

將 20 μL 250X OxiVision Green 過(guò)氧化氫探針儲(chǔ)備液加入 5 mL 檢測(cè)緩沖液（組分 C）中，制成 OxiVision Green 過(guò)氧化氫探針工作溶液。