Amplite 比色法葡萄糖-6-磷酸檢測試劑盒 是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測葡萄糖-6-磷酸的試劑盒，該檢測試劑盒是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于葡萄糖-6-磷酸（G6P）是葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞中的關(guān)鍵中間體。 G6P也可以轉(zhuǎn)化為糖原或淀粉，用于儲(chǔ)存在肝臟和肌肉中。 葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PD）利用G6P產(chǎn)生NADPH形式的還原當(dāng)量。 這在G6PDH缺乏導(dǎo)致溶血性貧血的紅細(xì)胞中尤為重要。 AAT Bioquest的檢測試劑盒為檢測生物樣品（如血清，血漿，尿液）以及細(xì)胞培養(yǎng)樣品中的G6P提供了一種簡單，靈敏，快速的方法。 在偶聯(lián)酶測定中，G6P濃度與NADPH成比例相關(guān)，NADPH由顯色NADPH傳感器特異性監(jiān)測。 吸收信號(hào)可以通過吸收酶標(biāo)儀在~575nm處讀取。 使用Amplite™G6P檢測試劑盒，我們能夠在100μL反應(yīng)體積中檢測低至1μM的G6P。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的Amplite 比色法葡萄糖-6-磷酸檢測試劑盒.

實(shí)驗(yàn)方案

96孔板測定示例

概述

制備G6P測定混合物（50μL）

加入G6P標(biāo)準(zhǔn)品或測試樣品（50μL）

在室溫下孵育30分鐘~2小時(shí)

監(jiān)測吸光度比率在A575nm / A605nm處增加

注意：在開始實(shí)驗(yàn)之前，在室溫下解凍試劑盒組分

操作方法

1.準(zhǔn)備NADP儲(chǔ)備溶液（100X）：

向小瓶中加入100μLH2O（組分C）以制備100X NADP儲(chǔ)備溶液。

2.準(zhǔn)備G6P原液：

將100μLH2 O或1×PBS緩沖液加入到G6P標(biāo)準(zhǔn)品（組分D）的小瓶中以制備100mM G6P標(biāo)準(zhǔn)溶液。

注意：未使用的G6P標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成單次使用的等分試樣并儲(chǔ)存在冰箱中。

3.準(zhǔn)備G6P標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋液（0至100μM）：

3.1將10μLG6P儲(chǔ)備溶液（來自步驟2）加入990L 1x PBS緩沖液中以產(chǎn)生1mM G6P標(biāo)準(zhǔn)溶液。 然后將10μL的1mM G6P儲(chǔ)備溶液加入990L 1x PBS緩沖液中以產(chǎn)生100μMG6P標(biāo)準(zhǔn)溶液。

注意：稀釋的G6P標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定，應(yīng)在4小時(shí)內(nèi)使用。

3.2取200μL的1 mM G6P標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋，得到30,10,3,1,0.3,0.1和0μM的G6P標(biāo)準(zhǔn)品系列稀釋液。

3.3如說明書中的表1和2中所述，將G6P標(biāo)準(zhǔn)品和含有G6P的測試樣品的系列稀釋液加入白色透明底96孔微孔板中。

4.準(zhǔn)備G6P分析混合物：

4.1將5 mL測定緩沖液（組分B）加入一瓶酶混合物（組分A）中。

4.2將50μLNAP原液（100X，步驟1）加入到組分A的瓶子中（來自步驟4.1），并充分混合。

注意：這種G6P測定混合物足以用于一個(gè)96孔板。 未使用的測定混合物應(yīng)分成單次使用的等分試樣并儲(chǔ)存在-20℃。

5.運(yùn)行G6P檢測：

5.1將50μLG6P測定混合物（來自步驟4.2）加入G6P標(biāo)準(zhǔn)品，空白對(duì)照和測試樣品的每個(gè)孔中（參見步驟3.3），使總測定體積為100μL/孔。

注意：對(duì)于384孔板，每孔加入25μL樣品和25μL測定混合物。

5.2在室溫下孵育反應(yīng)30分鐘至2小時(shí)，避光。

5.3使用吸光度板讀數(shù)器在A575nm / A605nm處檢測吸光度比率的增加。