Amplite 比色法D-乳酸檢測試劑盒是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測乳酸的試劑盒，乳酸是手性的并且具有兩種光學(xué)異構(gòu)體：L-乳酸和D-乳酸。 在代謝和運(yùn)動過程中，乳酸鹽通過乳酸脫氫酶（LDH）不斷從丙酮酸產(chǎn)生。 監(jiān)測乳酸水平是評估組織需氧量和利用率之間平衡的好方法，在研究細(xì)胞和動物生理學(xué)時(shí)非常有用。 D-乳酸不被哺乳動物代謝，其從體內(nèi)主要取決于腎臟排泄。 D-和L-乳酸存在于許多發(fā)酵乳制品中，例如酸奶和奶酪，以及腌制蔬菜，腌制肉類和魚類。 D-和L-乳酸含量是食品的質(zhì)量指標(biāo)，如雞蛋，牛奶，果汁和葡萄酒。 血液中異常高濃度的D-乳酸通常是胃腸道中過度生長的反映。

AAT Bioquest的試劑盒（L＃乳酸檢測Cat＃13814和13815，D-lactate檢測Cat＃13810和13811）提供熒光和吸光度檢測方法，用于檢測L-乳酸鹽或D-乳酸鹽。 生物樣品，如血清，血漿，尿液，以及細(xì)胞培養(yǎng)樣品。 在酶偶聯(lián)測定中，乳酸與NADH成比例相關(guān)，其通過生色NADH傳感器特異性監(jiān)測。 通過吸光度酶標(biāo)儀在~575nm或~A605nm的吸光度比下可以容易地讀取信號，以提高測定靈敏度。 使用這種檢測試劑盒，我們能夠在100μL反應(yīng)體積中檢測到低至4μM的D-乳酸。 它應(yīng)用廣泛，可以很容易地適用于需要測量D-乳酸的各種應(yīng)用。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的Amplite 比色法D-乳酸檢測試劑盒.

實(shí)驗(yàn)方案

96孔板測定示例

概述

制備D-乳酸測定混合物（50μL）

加入D-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品或測試樣品（50μL）

在室溫下孵育30分鐘~2小時(shí)

監(jiān)測吸光度比率在A575nm / A605nm處增加

注意：在開始實(shí)驗(yàn)之前，在室溫下解凍每個(gè)試劑盒組分的一個(gè)小瓶。

操作方法

1.準(zhǔn)備NAD儲備溶液（100X）：

向NAD小瓶（組分C）中加入100μLH2O，制成100X NAD儲備溶液。

2.準(zhǔn)備D-乳酸儲備液：

將200μLH2 O或1×PBS緩沖液加入到D-乳酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品（組分D）的小瓶中以制備100mM D-乳酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液。

注意：未使用的D-lacate標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液應(yīng)分成單次使用的等分試樣并儲存在-20℃。

3.準(zhǔn)備D-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品（0至1 mM）的連續(xù)稀釋液：

3.1將10μLD-乳酸儲備溶液（來自步驟2）加入990L 1x PBS緩沖液中以產(chǎn)生1mM D-乳酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液。

注意：稀釋的D-乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定，應(yīng)在4小時(shí)內(nèi)使用。

3.2取200μL的1mM D-乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋，得到300,100,30,10,3,1和0μM的D-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品系列稀釋液。

3.3如說明書中的表1和2中所述，將含有D-乳酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品和含D-乳酸鹽的測試樣品的系列稀釋液加入白色透明底96孔微量培養(yǎng)板中。

4.準(zhǔn)備D-乳酸測定混合物：

4.1將5 mL測定緩沖液（組分B）加入一瓶酶混合物（組分A）中。

4.2將50μLNAD儲備液（100X，來自步驟1）加入組分A（來自步驟4.1）的瓶中，并且混合均勻。

注意：這種D-乳酸測定混合物足以用于一個(gè)96孔板。 未使用的D-乳酸測定混合物應(yīng)分成單次使用的等分試樣并儲存在-20℃。

5.運(yùn)行D-乳酸測定：

5.1將50μLD-乳酸測定混合物（來自步驟4.2）添加到D-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品，空白對照和測試樣品（參見步驟3.3）的每個(gè)孔中，以使總D-乳酸測定體積為100μL/孔。

注意：對于384孔板，每孔加入25μL樣品和25μLD-乳酸測定混合物。

5.2在室溫下孵育反應(yīng)30分鐘至2小時(shí)，避光。

5.3用A575nm / A605nm的吸光度讀板儀檢測吸光度比率的增加。