Amplite 比色法β-內(nèi)酰胺酶活性檢測(cè)試劑盒是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的用于β-內(nèi)酰胺酶活性檢測(cè)的試劑盒，β-內(nèi)酰胺酶是能夠水解β-內(nèi)酰胺的大家族酶。β-內(nèi)酰胺環(huán)是所有β-內(nèi)酰胺中的常見(jiàn)成分，包括青*素衍生物，頭*菌素，單環(huán)內(nèi)酰胺和碳青霉烯類(lèi)。通過(guò)水解，β-內(nèi)酰胺酶使β-內(nèi)酰胺環(huán)打開(kāi)，從而使分子的性能失活。臨床和非臨床環(huán)境中的通過(guò)合成β-內(nèi)酰胺酶變得越來(lái)越對(duì)β-內(nèi)酰胺產(chǎn)生抗性。為了克服這種抗性，β-內(nèi)酰胺通常與β-內(nèi)酰胺酶抑制劑如克拉維酸一起給予。因此，檢測(cè)β-內(nèi)酰胺酶活性對(duì)于評(píng)估β-內(nèi)酰胺以及預(yù)防抗性至關(guān)重要。AAT Bioquest的比色β-內(nèi)酰胺酶活性測(cè)定試劑盒提供靈敏的比色測(cè)定，用于測(cè)量生物樣品中的β-內(nèi)酰胺酶活性。使用Nitrocefin檢測(cè)β-內(nèi)酰胺酶活性，其在β-內(nèi)酰胺酶水解后由黃色變?yōu)榧t色?？梢允褂梦舛让笜?biāo)儀通過(guò)測(cè)量波長(zhǎng)490nm至380nm的OD比來(lái)進(jìn)行測(cè)定。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的Amplite 比色法β-內(nèi)酰胺酶活性檢測(cè)試劑盒。

96孔板實(shí)驗(yàn)示例

概述

準(zhǔn)備β-內(nèi)酰胺酶測(cè)定混合物（50μL）

加入β-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品（50μL）

在室溫下孵育30-60分鐘

在OD比率為490 / 380nm時(shí)監(jiān)測(cè)吸光度增加

注意：在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前，在室溫下解凍每個(gè)試劑盒組分的一個(gè)小瓶。

操作方案

1.制備β-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：

將100μLddH2O加入到β-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)品（組分C）的小瓶中以制備50mU /mLβ-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。

注意：未使用的β-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液應(yīng)分成一次性等分試樣并儲(chǔ)存在-20oC。

2.準(zhǔn)備β-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)品的連續(xù)稀釋液：

2.1將10μLβ-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（50 mU / mL，步驟1）加入990 L 1×PBS緩沖液中，生成500μU/mLβ-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)溶液。

注意：稀釋的β-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定，應(yīng)及時(shí)使用。

2.2取200μL500μU/mLβ-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)溶液，在PBS中進(jìn)行1：2連續(xù)稀釋?zhuān)玫郊s250,125,62.5,31.3,15.6,7.8和0μU/ mL系列稀釋的β-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)品。

2.3如說(shuō)明書(shū)中的表1和2中所述，將含有β-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)品和含β-內(nèi)酰胺酶的測(cè)試樣品的系列稀釋液加入到96孔透明底部微量培養(yǎng)板中。

3.準(zhǔn)備β-內(nèi)酰胺酶測(cè)定混合物：

將50μL硝基呋喃儲(chǔ)備溶液（組分A）加入5mL組分B中，充分混合，制成β-內(nèi)酰胺酶測(cè)定混合物（組分A + B）。

注意：這種β-內(nèi)酰胺酶測(cè)定混合物足以用于一個(gè)96孔板。 β-內(nèi)酰胺酶測(cè)定混合物不穩(wěn)定，每次使用都要新鮮。

4.運(yùn)行β-內(nèi)酰胺酶測(cè)定：

4.1將50μLβ-內(nèi)酰胺酶測(cè)定混合物（來(lái)自步驟3）添加到β-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)品，空白對(duì)照和測(cè)試樣品的每個(gè)孔中（參見(jiàn)步驟2.3），使總體積為100μL/孔。

注意：對(duì)于384孔板，每孔加入25μL樣品和25μLβ-內(nèi)酰胺酶測(cè)定混合物。

4.2在室溫下孵育反應(yīng)30-60分鐘，避光。

4.3使用吸光度讀板儀檢測(cè)OD比為490/380 nm時(shí)的吸光度增加。