Amplite 熒光法神經(jīng)氨酸酶檢測(cè)試劑盒是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的用于β-半乳糖苷酶的試劑盒，神經(jīng)氨酸酶，也稱(chēng)為唾液酸酶，是糖苷水解酶，其催化末端唾液酸殘基和神經(jīng)氨酸的水解。常見(jiàn)的神經(jīng)氨酸酶是病毒神經(jīng)氨酸酶。唾液酸和鄰近糖殘基之間的連接的切割允許病毒通過(guò)粘蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)并破壞宿主細(xì)胞上的血凝素受體，從而允許從感染細(xì)胞中洗脫后代病毒顆粒。神經(jīng)氨酸酶促進(jìn)感染細(xì)胞釋放流感病毒，并促進(jìn)病毒在呼吸道內(nèi)傳播。因此，它是流感開(kāi)發(fā)的重要目標(biāo)。神經(jīng)氨酸酶的檢測(cè)和篩選其抑制劑是研究生物過(guò)程和預(yù)防流感感染的重要任務(wù)之一。有一些檢測(cè)試劑盒可用于檢測(cè)神經(jīng)氨酸酶，但所有商業(yè)上可用的試劑盒使用起來(lái)都很繁瑣。我們的Amplite 熒光神經(jīng)氨酸酶檢測(cè)試劑盒提供靈敏且穩(wěn)定的熒光測(cè)定法，可檢測(cè)細(xì)胞或生物樣品中存在的神經(jīng)氨酸酶。在神經(jīng)氨酸酶切割后，非熒光神經(jīng)氨酸酶底物變?yōu)閺?qiáng)熒光。該試劑盒可在100μL測(cè)定體積中檢測(cè)低至0.3 mU / mL的神經(jīng)氨酸酶。該測(cè)定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進(jìn)行，并且易于適應(yīng)自動(dòng)化而無(wú)需分離步驟。熒光酶標(biāo)儀在Ex / Em = ~320 / ~450nm處可以容易地讀取信號(hào)。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的Amplite 熒光法神經(jīng)氨酸酶檢測(cè)試劑盒。

樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡(jiǎn)要概述

1.準(zhǔn)備神經(jīng)氨酸酶工作溶液（50 µL）
2.加入神經(jīng)氨酸酶標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品（50 µL）
3.在37°C或室溫下孵育1-2小時(shí)
4.監(jiān)控Ex / Em = 320/460 nm（截止= 420 nm）的熒光增加

溶液制備

1.儲(chǔ)備溶液

所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。 避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1.1 神經(jīng)氨酸酶標(biāo)準(zhǔn)溶液（2U / mL）：
將50 µL ddH2O加入小瓶神經(jīng)氨酸酶標(biāo)準(zhǔn)品（組分C）中，制成約2 U / mL神經(jīng)氨酸酶標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2 FluLite 藍(lán)色原液（200X）：
將50 µL ddH2O加入FluLite Blue（組分A）小瓶中，制成200X儲(chǔ)備溶液。

2.標(biāo)準(zhǔn)溶液

神經(jīng)氨酸酶標(biāo)準(zhǔn)品
將10 µL的2 U / mL神經(jīng)氨酸酶標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液加到990 µL的測(cè)定緩沖液（組分B）中，以生成20 mU / mL的神經(jīng)氨酸酶標(biāo)準(zhǔn)品（NA7）。 取20 mU / mL神經(jīng)氨酸酶標(biāo)準(zhǔn)溶液，并按1：2進(jìn)行系列稀釋?zhuān)允褂梅治鼍彌_液（組分B）獲得系列稀釋的神經(jīng)氨酸酶標(biāo)準(zhǔn)品（NA6-NA1）。 注意：稀釋的神經(jīng)氨酸酶標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定。 在4小時(shí)內(nèi)使用。

3.工作溶液

3.1 0.3％β-巰基乙醇測(cè)定緩沖液：
將30 µLβ-巰基乙醇（組分F）添加到10 mL反應(yīng)緩沖液（組分B）中，并充分混合。
注意：制備酶稀釋緩沖液需要額外的緩沖液，用于生成標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3.2 FDG工作方案：
將25 µL 1X FDG儲(chǔ)備溶液加到5 mL的0.3％β-巰基乙醇測(cè)定緩沖液中。 注意：請(qǐng)勿將FDG溶液在室溫下長(zhǎng)時(shí)間放置，否則會(huì)發(fā)生自發(fā)水解。

3.3 裂解緩沖液工作液：
將25μL的200X FluLite 藍(lán)色儲(chǔ)備溶液添加到5 mL的測(cè)定緩沖液（組分B）中并充分混合以制備神經(jīng)氨酸酶工作溶液。