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當(dāng)前位置:西安百螢生物科技有限公司>>*綴合物>> 5520ReadiLink 蛋白質(zhì)生物su偶聯(lián)試劑盒

ReadiLink 蛋白質(zhì)生物su偶聯(lián)試劑盒

參  考  價(jià)面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號5520

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)代理商

所  在  地西安市

更新時間:2024-01-30 18:18:32瀏覽次數(shù):93次

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ReadiLink 蛋白質(zhì)生物su偶聯(lián)試劑盒是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的*偶聯(lián)試劑盒,*廣泛用于標(biāo)記生物分子,特別是抗體。 我們的ReadiLink 蛋白質(zhì)*化試劑盒經(jīng)過優(yōu)化,可用于制備用于酶免疫測定(EIA)的*標(biāo)記的IgG。 它使用與IgG和其他生物分子的氨基反應(yīng)的*琥珀酰亞胺酯。 該試劑盒配有所有必需的標(biāo)記和純化試劑。 在我們的手上,根據(jù)IgG分子上可用的分子量和賴氨酸殘基,可以將3至6個*分子與每個IgG分子綴合。 該試劑盒可用于2種綴合反應(yīng)。 對于每個綴合反應(yīng),該材料可以標(biāo)記高達(dá)1mg蛋白質(zhì)。 整個過程只需不到一個小時。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商,為您提供的ReadiLink 蛋白質(zhì)生物su偶聯(lián)試劑盒。

實(shí)驗(yàn)方案

樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡要概述

將20μl反應(yīng)緩沖液(組分B)加入目標(biāo)蛋白(200μl)中
將蛋白質(zhì)溶液添加到ReadiLink Biotin SE(組分A)中
在室溫下孵育30-60分鐘
通過旋轉(zhuǎn)柱純化綴合物


工作溶液配制

蛋白質(zhì)工作溶液配制方案:
為了標(biāo)記1mg靶蛋白(假設(shè)目標(biāo)蛋白濃度為5mg / mL),將20μL(總反應(yīng)體積的10%)的反應(yīng)緩沖液(組分B)與200μL目標(biāo)蛋白溶液混合。注意:如果您的蛋白質(zhì)濃度不同,請相應(yīng)調(diào)整蛋白質(zhì)體積,使~1 mg蛋白質(zhì)可用于此標(biāo)記反應(yīng)。注意:蛋白質(zhì)溶液的pH值應(yīng)為8.5±0.5。如果蛋白質(zhì)溶液的pH低于8.0,則使用反應(yīng)緩沖液(組分B)或飽和碳s氫鈉溶液將pH調(diào)節(jié)至8.0-9.0的范圍。注意:蛋白質(zhì)應(yīng)溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中。如果蛋白質(zhì)溶解在Tris或甘an酸緩沖液中,則必須用pH7.2-7.4的1X PBS透析,以除去廣泛用于蛋白質(zhì)沉淀的游離胺或銨鹽(例如硫酸銨和乙酸銨)。注意:用牛血清白蛋白(BSA)或明膠穩(wěn)定的不純抗體或抗體可能效果不佳。疊d化鈉或硫柳汞的存在也可能干擾綴合反應(yīng)。可以通過透析或旋轉(zhuǎn)柱除去疊d化鈉或硫柳汞,以獲得標(biāo)記結(jié)果。注意:如果蛋白質(zhì)濃度低于2 mg / mL,則結(jié)合效率會顯著降低。為獲得標(biāo)記效率,建議蛋白質(zhì)濃度范圍為2-10 mg / mL。


操作步驟

1.進(jìn)行結(jié)合反應(yīng)

1.1將蛋白質(zhì)工作溶液加入到ReadiLink 生物sSE(組分A)的小瓶中,通過反復(fù)移液幾次將其充分混合,或者將小瓶渦旋幾秒鐘。

1.2將綴合反應(yīng)混合物在室溫下保持30-60分鐘。注意:如果需要,可以旋轉(zhuǎn)或搖動綴合反應(yīng)混合物更長的時間。


2.準(zhǔn)備旋轉(zhuǎn)柱進(jìn)行樣品純化

2.1將提供的旋轉(zhuǎn)柱(組分C)反轉(zhuǎn)幾次以重新懸浮沉降的凝膠并除去任何氣泡。

2.2將色譜柱放入洗滌管(2 mL,未提供)中。取下蓋子,讓多余的填料緩沖液通過重力排放到凝膠床的頂部。如果色譜柱沒有開始流動,請將蓋子推回色譜柱并再次將其取出以開始流動。丟棄排出的緩沖液,然后將色譜柱放回洗滌管中。但是,如果將色譜柱放入12 x 75 mm試管(未提供)中,請立即離心。

2.3在搖動式離心機(jī)中以1,000×g離心1分鐘(參見“離心注釋"部分)以除去包裝緩沖液。

2.4向柱中加入1-2 mL 1X PBS(pH 7.2-7.4)。每次施用PBS后,讓緩沖液通過重力排出,或?qū)⒅x心2分鐘以除去緩沖液。丟棄收集管中的緩沖液。重復(fù)此過程3-4次。

2.5在搖動式離心機(jī)中以1,000×g離心2分鐘(參見“離心注意事項(xiàng)"部分)以除去包裝緩沖液。


3.純化綴合物

3.1將色譜柱(從步驟準(zhǔn)備旋轉(zhuǎn)柱進(jìn)行樣品純化)放入干凈的收集管(1.5 mL,未提供)中。 小心地將樣品(100-500μL,來自步驟綴合反應(yīng))直接加載到色譜柱中心。

3.2加載樣品后,加入300μL1XPBS(pH 7.2-7.4),使總體積為220μL至520μL。 將柱以1,000xg離心5-6分鐘,并收集含有所需生物s標(biāo)記蛋白的溶液。


4.蛋白質(zhì)綴合物的儲存

4.1抗體綴合物應(yīng)在載體蛋白(例如0.1%牛血清白蛋白)存在下以> 0.5mg / mL儲存。 當(dāng)在2mM疊d化鈉存在下儲存并且避光時,綴合物溶液可以在4℃下儲存兩個月而沒有顯著變化。 為了更長時間的儲存,可以將蛋白質(zhì)綴合物凍干或分成單次使用的等分試樣并在≤-60℃下儲存。


5.離心注意事項(xiàng)

5.1旋轉(zhuǎn)柱(組分C)可以裝入2mL微量離心管或12×75mm試管中,用于在離心過程中收集樣品。 使用2 mL微管和色譜柱進(jìn)行初始色譜柱平衡步驟。

5.2能夠產(chǎn)生1,000 x g的小力的擺動式離心機(jī)適用于Bio-Spin柱。 在特定轉(zhuǎn)速下產(chǎn)生的重力是微量離心機(jī)轉(zhuǎn)子半徑的函數(shù)。 有關(guān)從每分鐘轉(zhuǎn)數(shù)(RPM)到離心力或g力的轉(zhuǎn)換信息,請參閱擺動式離心機(jī)說明手冊。 或者,使用以下等式計(jì)算達(dá)到1,000 x g重力所需的RPM速度。

5.3RCF(xg)=(1.12 x 10-5)×(RPM)×2×r(RCF是相對離心力,r是從轉(zhuǎn)子中心到Bio-Spin柱中間測量的以厘米為單位的半徑 ,RPM是轉(zhuǎn)子的速度)。






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