樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡要概述

1.準(zhǔn)備測試樣品和連續(xù)稀釋的α-酮戊二酸標(biāo)準(zhǔn)品（50μL）
2.加入等體積的α-酮戊二酸工作液（50μL）
3.在37°C孵育60-90分鐘
4.監(jiān)測570nm處的吸光度強(qiáng)度

溶液制備

1.儲備溶液

所有未使用的儲備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。
1.1 Amplite 紅色儲備液（200X）：
將50μLDMSO（組分E）加入到Amplite Red（組分A）的小瓶中以制備200X儲備溶液。

2.標(biāo)準(zhǔn)溶液

2.1α-酮戊二酸標(biāo)準(zhǔn)
將10μL10mMα-酮戊二酸標(biāo)準(zhǔn)品（組分D）加入990μLPBS中，得到100μMα-酮戊二酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（AKG7）。 然后進(jìn)行1：2連續(xù)稀釋以獲得連續(xù)稀釋的α-酮戊二酸標(biāo)準(zhǔn)品（AKG6-AKG1）。

3.工作溶液

3.1將5 mL測定緩沖液（組分C）加入一個酶混合物1瓶（組分B1）中并充分混合。

3.2將100μLDdH2O加入一個酶混合物2小瓶（組分B2）中并充分混合。

3.3將整個小瓶（100μL）的酶混合物2和25μL的200X Amplite Red儲備溶液轉(zhuǎn)移到小瓶混合物1的小瓶中并充分混合以制備α-酮戊二酸的工作溶液。 注意：5mLα-酮戊二酸工作溶液足以容納一個96孔板。 它不穩(wěn)定，請及時使用。