樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡(jiǎn)要概述

1.準(zhǔn)備并添加cADPR標(biāo)準(zhǔn)和/或測(cè)試樣品（50 µL）
2.準(zhǔn)備并添加ADRPC工作溶液（50 µL）
3.在室溫下孵育1小時(shí)
4.添加40 µL Quest Fluor NAD探針
5.添加40 µL測(cè)定溶液
6.在室溫下孵育20分鐘
7.添加30 µL增強(qiáng)劑溶液
8.在室溫下孵育20分鐘
9.在Ex / Em = 420/480 nm處監(jiān)控?zé)晒鈴?qiáng)度

溶液制備

1.儲(chǔ)備溶液

所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。 避免重復(fù)凍融循環(huán)。
cADPR標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（5 mM）：
將10 µL ddH2O加入cADPR標(biāo)準(zhǔn)樣品瓶（組分F）中，并充分混合。 注意：未使用的cADPR儲(chǔ)備溶液應(yīng)以-20℃一次等份保存。

2.標(biāo)準(zhǔn)溶液

cADPR標(biāo)準(zhǔn)
注意：在測(cè)定溶液I（組分C）中準(zhǔn)備cADPR系列稀釋液。

3.工作溶液

ADPRC工作溶液：
將50 µL ddH2O加入ADPRC酶混合物（組分B）的小瓶中，并充分混合。 將全部?jī)?nèi)容物轉(zhuǎn)移到5毫升測(cè)定溶液I（組分C）中，并充分混合。 注意：ADPRC工作溶液不穩(wěn)定，請(qǐng)立即使用。