樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡(jiǎn)要概述

準(zhǔn)備膽*醇檢測(cè)工作溶液（50μL）
添加膽*醇標(biāo)準(zhǔn)品和/或測(cè)試樣品（50μL）
在37°C孵育30分鐘
在Ex / Em = 540 / 590nm處監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度

溶液配制

1.儲(chǔ)備溶液配制

除非另有說明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。
1.1 Amplite 紅色儲(chǔ)備液（250X）：
將40μLDMSO（組分E）加入到Amplite Red底物（組分A）的小瓶中。應(yīng)立即使用原液。任何剩余的溶液應(yīng)等分并在-20℃重新冷凍。注意：避免反復(fù)凍融循環(huán)。注意：在硫醇如二硫蘇糖醇（DTT）和2-巰*乙醇存在下，Amplite Red底物不穩(wěn)定。反應(yīng)中DTT或2-巰*乙醇的濃度應(yīng)不高于10μM。 Amplite Red底物在高pH（> 8.5）下也不穩(wěn)定。因此，反應(yīng)應(yīng)在pH 7-8下進(jìn)行。建議使用提供的分析緩沖液（pH 7.4）。

1.2膽*醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（20μM）：
將10μL膽*醇標(biāo)準(zhǔn)品（組分D）加入990μL測(cè)定緩沖液（組分B）中并充分混合。

2.標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

2.1膽*醇標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
準(zhǔn)備膽*醇標(biāo)準(zhǔn)品（20μM）。 然后在測(cè)定緩沖液（組分B）中進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋，得到約10,3,1,0.3,0.1,0.03和0.01μM系列稀釋的膽*醇標(biāo)準(zhǔn)品。 包括非膽*醇緩沖液對(duì)照作為空白對(duì)照。

3.工作溶液配制

膽*醇工作溶液配制：
將5mL測(cè)定緩沖液（組分B）加入膽*醇酶混合物（組分C）的瓶中，并充分混合。 在膽*醇酶混合瓶中加入20μLDipiteRed 儲(chǔ)備液（250X）。