MitoLite 染料的分析方案

概述

準備細胞

添加染料工作溶液

在37°C孵育30分鐘至2小時

清洗細胞

在熒光顯微鏡下分析

操作步驟

1.準備線粒體染色溶液：

1.1解凍MitoLite 染料至室溫。

1.2通過將20μL500X Mitolite 染料稀釋到10 mL Hanks和20 mm Hepes緩沖液或緩沖液（HBSS）中，制備染料工作溶液。

注1：20μLMitolite 染料足以用于一個96孔板。 在<-15℃下分裝并儲存未使用的MitoLite 染料儲備溶液。 保護它免受光照，避免反復凍融循環(huán)。

注2：熒光線粒體指示劑的濃度根據具體應用而變化。 可以根據特定細胞類型和細胞或組織對探針的滲透性來修改染色條件。

2.準備和染色細胞：

2.1對于貼壁細胞：a.在96孔黑色壁/透明底板（100μL/孔/ 96孔板）中或在裝有適當培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿內的蓋玻片上培養(yǎng)細胞。當細胞達到所需的匯合時，加入等體積的染料工作溶液（來自步驟1.2）。 b.將細胞在37oC，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育30分鐘至2小時。 c.用預熱（37oC）Hanks和20 mM Hepes緩沖液（HBSS）或您選擇的緩沖液（例如濃度為1：1的生長培養(yǎng)基緩沖液）替換染料加載溶液或清洗（特別是對于＃22679）細胞。用HBSS或生長培養(yǎng)基填充細胞孔。 d.使用配有所需濾光片組的熒光顯微鏡觀察細胞。

注意：如果細胞看起來沒有充分染色，建議增加標記濃度或孵育時間以使染料積累。

2.2對于懸浮細胞：將細胞以1000rpm離心5分鐘以獲得細胞沉淀并吸出上清液。在預熱（37℃）生長培養(yǎng)基中輕輕重懸細胞沉淀，并加入等體積的染料加工溶液（來自步驟1.2）。將細胞在37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育30分鐘至2小時。用Hanks和20mM Hepes緩沖液（HH緩沖液）或緩沖液替換染料加載溶液或洗滌（特別是對于＃22679）。（例如生長培養(yǎng)基濃度為1：1的緩沖液）。用HBSS或生長培養(yǎng)基填充細胞孔。使用配有所需濾光片組的熒光顯微鏡觀察細胞。

注1：如果細胞看起來沒有充分染色，建議增加標記濃度或培養(yǎng)時間以使染料積累。

注2：懸浮細胞可以附著在用BD Cell-Tak®（BD Biosciences）處理過的蓋玻片上，并作為粘附細胞染色（見步驟2.1）。