樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡(jiǎn)要概述

1.準(zhǔn)備細(xì)菌樣本
2.準(zhǔn)備并將MycoLight 染料工作溶液添加到細(xì)菌樣品中
3.在室溫下與MycoLight 染料工作溶液在黑暗中孵育15分鐘
4.使用FITC和TRITC濾光片組通過(guò)熒光顯微鏡或熒光光譜分析樣品

溶液制備

1.工作溶液配制

1.1MycoLight 染料工作溶液：
在試管中混合等體積的MycoLight 綠色（組分A）和MycoLight 紅色（組分B），并充分混合。

樣品示例及操作

1.細(xì)菌樣品的制備

1.1準(zhǔn)備濃度約為107cells / ml的細(xì)菌樣品。 在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中使細(xì)菌生長(zhǎng)到對(duì)數(shù)后期。 注意：在波長(zhǎng)= 600 nm（OD600）處測(cè)量細(xì)菌培養(yǎng)物的光密度，以確定細(xì)胞數(shù)。 對(duì)于大腸桿菌培養(yǎng)，OD600 = 1.0等于8 x 108細(xì)胞/ ml。

1.2通過(guò)以10,000 x g離心10分鐘除去培養(yǎng)基，然后將沉淀重新懸浮在ddH2O中，將細(xì)菌濃度調(diào)節(jié)至?107細(xì)胞/ ml。

2.染色方案

2.1向100 µL細(xì)菌懸液中加入2 µL MycoLight 染料工作溶液。

2.2充分混合并在室溫下于黑暗中孵育15分鐘。

2.3用熒光顯微鏡通過(guò)FITC（Ex / Em = 488/530 nm）通道監(jiān)測(cè)革蘭氏陰性細(xì)菌的熒光，并通過(guò)TRITC（Ex / Em = 540/620 nm）通道監(jiān)測(cè)革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的熒光。 注意：該試劑盒僅提供指導(dǎo)，應(yīng)根據(jù)不同的細(xì)菌菌株或其他特定需求進(jìn)行優(yōu)化。 注意：該試劑盒中的革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌的相對(duì)比例也可以通過(guò)熒光光譜法估算。