線粒體膜電位熒光探針JC-1 CAS 3520-43-2是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于線粒體膜電位檢測(cè)的試劑，JC-1廣泛用于通過流式細(xì)胞術(shù)確定線粒體膜電位。它能夠選擇性地進(jìn)入線粒體，并且隨著線粒體膜電位增加（超過約80-100mV的值）可逆地將其顏色從綠色變?yōu)槌壬?。這種性質(zhì)是由于線粒體膜極化后JC-1聚集體的可逆形式導(dǎo)致發(fā)射光從530nm（即JC-1單體形式的發(fā)射）轉(zhuǎn)變?yōu)?90nm（即J-聚集形式的發(fā)射）。當(dāng)在490nm處激發(fā)時(shí)，隨著線粒體膜變得更加極化，JC-1的顏色從綠色橙色可逆地變?yōu)榫G色橙色。使用通常安裝在所有流式細(xì)胞儀中的濾波器可以檢測(cè)兩種顏色，可以在熒光通道1（FL1）中分析綠色發(fā)射，在通道2（FL2）中分析綠色橙色發(fā)射。使用JC-1的主要優(yōu)點(diǎn)是，它可以從綠色到橙色熒光發(fā)射轉(zhuǎn)移，它既可以定性，又可以在FL1和FL2通道中檢測(cè)到純熒光強(qiáng)度又可以定量。除了廣泛用于流式細(xì)胞儀外，JC-1還用于熒光成像。我們已經(jīng)開發(fā)出一種在熒光酶標(biāo)儀平臺(tái)中使用它的方案，盡管JC-1在許多實(shí)驗(yàn)室中被廣泛使用，但其水溶性差使得它在某些應(yīng)用中難以使用。我們的JC-10具有比JC-1更好的水溶性，并且JC-10在一些細(xì)胞系中具有優(yōu)于JC-1的性能。百螢生物是AAT Bioquest 的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的線粒體膜電位熒光探針JC-1 CAS 3520-43-2。

JC-1樣品分析方案

概述

用測(cè)試化合物制備細(xì)胞

添加JC-1工作溶液（100μL/孔用于96孔板或25μL/孔用于384孔板）在室溫或37℃孵育1小時(shí)

移除JC-1工作溶液

讀取 Ex / Em = 490 / 525nm和490 / 590nm處的熒光強(qiáng)度

注意：以下是我們推薦的活細(xì)胞方案。該方案僅提供指南，實(shí)際情況應(yīng)根據(jù)您的具體實(shí)驗(yàn)進(jìn)行調(diào)整修改。

1.準(zhǔn)備JC-1工作溶液：

1.1在高質(zhì)量無水DMSO中制備2至10 mM JC-1的儲(chǔ)備液。 應(yīng)隨用隨配及時(shí)使用或等分配制，應(yīng)將使用剩余的溶液等分并在<-20℃冷凍。

注意：避免反復(fù)凍融循環(huán)，避免光照。

1.2制備1X JC-1工作溶液：在實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，將JC-1固體溶解在DMSO中或?qū)⒌确衷嚇拥腏C-1儲(chǔ)備溶液解凍至室溫。在Hanks和20 mM Hepes緩沖液（HHBS）或其他緩沖液（pH 7）和0.02％Pluronic®F-127中制備10至30μM1XJC-1工作溶液。

注意：JC-1不溶于水，因此它會(huì)在溶液中聚集。 建議在將JC-1工作溶液加載到微孔板之前對(duì)其進(jìn)行過濾。

2.用熒光酶標(biāo)儀進(jìn)行JC-1檢測(cè)：

2.1用測(cè)試化合物細(xì)胞培養(yǎng)所需的一段時(shí)間（例如，Jurkat細(xì)胞可以用*樹堿處理4-6小時(shí)）以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。對(duì)于空白孔（沒有細(xì)胞的培養(yǎng)基），加入相應(yīng)量的化合物緩沖液。

2.2將100μL/孔的96孔板或25μL/孔的384孔板的JC-1工作溶液（來自步驟1.2）加入到細(xì)胞板中。

2.3將JC-1加載在37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)15-60分鐘。

注意：適當(dāng)?shù)姆跤龝r(shí)間取決于所使用的單個(gè)細(xì)胞類型和細(xì)胞濃度，每個(gè)實(shí)驗(yàn)的孵育時(shí)間需要根據(jù)相應(yīng)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行控制。

2.4從平板上取下JC-1工作溶液，用HHBS或其他緩沖液清洗細(xì)胞。 將100μL/孔的96孔板或25μL/孔的384孔HHBS板加回到細(xì)胞板中。

2.5監(jiān)測(cè)Ex / Em = 490 / 525nm和490 / 590nm處的熒光變化以進(jìn)行比率分析。

3.用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀進(jìn)行JC-1測(cè)定：

3.1用測(cè)試化合物細(xì)胞培養(yǎng)所需的一段時(shí)間（例如，Jurkat細(xì)胞可以用*樹堿處理4-6小時(shí)）以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

3.2離心細(xì)胞，每管取1-5×105個(gè)細(xì)胞。

3.3在500μLJC-1工作溶液中重懸細(xì)胞（來自步驟1.2）。

3.4在室溫或37°C下避光孵育10至30分鐘。

3.5用HHBS或其他緩沖液洗滌細(xì)胞。將細(xì)胞重懸于500μLHHBS中以獲得每管1-5×105個(gè)細(xì)胞。

3.6用熒光顯微鏡（使用FITC和TRITC濾光片）或流式細(xì)胞儀（使用FL1和FL2通道）觀察Ex / Em = 490 / 525nm和490 / 590nm處的熒光變化。