細(xì)胞轉(zhuǎn)染-QuickShuttle-Enhanced-轉(zhuǎn)染試劑增強(qiáng)型

貨號(hào)：KX0110042 

含量：0.8 ml 

用途：

（1）用于大多數(shù)哺乳動(dòng)物貼壁細(xì)胞系的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建； 

（2）用于難轉(zhuǎn)哺乳動(dòng)物細(xì)胞系的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建。

 注意事項(xiàng)：

 1. 質(zhì)粒 DNA：請(qǐng)用能夠去除內(nèi)毒素的方法制備高質(zhì)量的質(zhì)粒 DNA。

 2. 稀釋液：0.85%（W/V）生理鹽水，用低內(nèi)毒素純水配制，高壓消毒或除菌過(guò)濾。

 3. 培養(yǎng)基：經(jīng)過(guò) DMEM、RPMI-1640 和 M199 等常規(guī)培養(yǎng)基測(cè)試，推薦使用含 5~10%牛血清的 DMEM，若轉(zhuǎn)染效果不理想可嘗試其它培養(yǎng)基。

 4. 以 24 孔細(xì)胞板轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)為例，推薦每孔低內(nèi)毒素質(zhì)粒 DNA 用量為 1~2µg、轉(zhuǎn)染試劑用量為 3~5µl， 請(qǐng)?jiān)谡綄?shí)驗(yàn)前根據(jù)不同細(xì)胞和不同培養(yǎng)基用報(bào)告基因進(jìn)行優(yōu)化。

 5. 如果實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟诤Y選抗藥性穩(wěn)定細(xì)胞系，可在細(xì)胞傳代后尚未貼壁時(shí)直接進(jìn)行轉(zhuǎn)染，從而可節(jié)省 18~24 小時(shí)的轉(zhuǎn)染前細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間。 使用方法：

 1. 轉(zhuǎn)染前 18~24 小時(shí)接種細(xì)胞到 24 孔細(xì)胞板中，每孔 5~10×104細(xì)胞，1ml 培養(yǎng)基。

備注：如果篩 選抗藥性穩(wěn)定細(xì)胞系，可以考慮簡(jiǎn)化的實(shí)驗(yàn)步驟，即在細(xì)胞傳代后直接按下述步驟 2~5 進(jìn)行轉(zhuǎn)染，無(wú) 需 18~24 小時(shí)的等候時(shí)間。

 2. 將 1~2μg 質(zhì)粒 DNA 和 3~5μl 轉(zhuǎn)染試劑分別稀釋到 50μl 生理鹽水中。

備注：質(zhì)粒 DNA 和轉(zhuǎn)染試劑的 量需要根據(jù)不同細(xì)胞和不同培養(yǎng)基來(lái)優(yōu)化，但理論上不超出 1~2µg 和 3~5µl 范圍。 

3. 合并上述兩溶液并混勻。備注：無(wú)需其它轉(zhuǎn)染試劑所需的 10~30 分鐘的等候時(shí)間。 

4. 將上述復(fù)合物直接加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中，輕搖細(xì)胞板或用加樣器吸打混勻。

備注：轉(zhuǎn)染復(fù)合物可直接 加入含血清的細(xì)胞培養(yǎng)基中進(jìn)行轉(zhuǎn)染。在極少情況下會(huì)出現(xiàn)貼壁細(xì)胞脫落現(xiàn)象，可先從待轉(zhuǎn)染細(xì)胞孔中吸取 500µl 培養(yǎng)基與轉(zhuǎn)染復(fù)合物預(yù)混后再加入細(xì)胞中。若在細(xì)胞瓶中進(jìn)行轉(zhuǎn)染，直接加入到無(wú)細(xì)胞 貼壁的對(duì)面或側(cè)面并搖勻即可。

 5. 將細(xì)胞板移至 37oC/5% CO2 孵箱中進(jìn)行培養(yǎng)。備注：無(wú)需在轉(zhuǎn)染后 4~6 小時(shí)補(bǔ)加血清或更換培養(yǎng) 基。

 6. 24~72 小時(shí)后根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá)分析或穩(wěn)定細(xì)胞系加壓篩選。