天根 動(dòng)物組織總RNA提取試劑盒 DP431

RNAprep pure Tissue Kit 采用離心吸附柱和的緩沖系統(tǒng)，可從動(dòng)物組織中快速提取總RNA，可同時(shí)處理大量不同樣品。30-40 分鐘內(nèi)即可完成反應(yīng)，提取的總RNA純度高，沒(méi)有蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)污染。

天根 動(dòng)物組織總RNA提取試劑盒 DP431產(chǎn)品特點(diǎn)：

針對(duì)動(dòng)物組織配置，操作更簡(jiǎn)單、流程更優(yōu)化。

配有DNaseⅠ，可有效去除DNA 污染。

RNA純度更高，無(wú)雜質(zhì)殘留，特別適合于對(duì)純度要求很高的下游實(shí)驗(yàn)。

操作安全可靠，無(wú)需氯化銫梯度離心，無(wú)需氯化鋰或乙醇沉淀。

RT-PCR

Northern blot、Dot blot

Real-time RT-PCR

芯片分析

polyA 篩選、體外翻譯、RNase 保護(hù)分析和分子克隆

樣本保存推薦使用RNAstore 樣本保存液(DP408)進(jìn)行組織樣本的保存。

預(yù)防RNase污染，應(yīng)注意以下幾方面

1. 經(jīng)常更換新手套。因?yàn)槠つw經(jīng)常帶有細(xì)菌，可能導(dǎo)致RNase污染。

2. 使用無(wú)RNase的塑料制品和槍頭避免交叉污染。

3. RNA在裂解液RL中時(shí)不會(huì)被RNase降解。但提取后繼續(xù)處理過(guò)程中應(yīng)使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。

4. 玻璃器皿可在150℃烘烤4 h，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10min，然后用水清洗，再滅菌，即可去除RNase。

5. 配制溶液應(yīng)使用RNase-Free ddH2O。（將水加入到干凈的玻璃瓶中，加入DEPC至終濃度0.1%( v/v)，混勻后放置過(guò)夜，高壓滅菌。）使用前注意事項(xiàng)1. 操作前在RL中加入β-巰基乙醇至終濃度1%，如1 ml RL中加入10 μl β-巰基乙醇。此裂解液現(xiàn)用現(xiàn)配。

6. 配好的RL 4℃可放置一個(gè)月，裂解液RL在儲(chǔ)存時(shí)可能會(huì)形成沉淀，如果有沉淀出現(xiàn)，請(qǐng)加熱溶解后使用。2. 次使用前應(yīng)在漂洗液RW中加入無(wú)水乙醇，加入量請(qǐng)參見(jiàn)瓶上標(biāo)簽。

7. 以下操作如非指明，均在室溫下進(jìn)行。DNase I儲(chǔ)存液的配制將DNase I干粉（1500 U）溶解在550 μl RNase-Free ddH2O中，輕柔混勻，分裝后-20℃貯存（可保存9個(gè)月）。

8. 注意：從-20℃融化后的DNase I儲(chǔ)存液保存于4℃（可保存6周），不要再次凍存。

RNA純度及濃度檢測(cè)

完整性： RNA可用普通瓊脂糖凝膠電泳 (電泳條件：膠濃度1.2%；0.5×TBE電泳緩沖 液；150V，15 min)檢測(cè)完整性。由于細(xì)胞中70%-80%的RNA為rRNA，電泳后UV下應(yīng)能看 到非常明顯的rRNA條帶。28S rRNA的量約為18S rRNA的兩倍，說(shuō)明RNA的完整性較好。

純度：OD260/OD280比值是衡量蛋白質(zhì)污染程度的指標(biāo)。高質(zhì)量的RNA，OD260/OD280讀 數(shù)在1.8-2.1之間，比值為2.0是高質(zhì)量RNA的標(biāo)志. OD260/OD280讀數(shù)受測(cè)定所用溶液的pH值 影響。同一個(gè)RNA樣品，假定在10 mM Tris，pH7.5溶液中測(cè)出的OD260/OD280讀數(shù)1.8-2.1之 間，在水溶液中所測(cè)讀數(shù)則可能在1.5-1.9之間，但這并不表示RNA不純。

濃度：取一定量的 RNA 提取物，用RNase-Free ddH2O稀釋n 倍，用RNase-Free ddH2O將分光光度計(jì)調(diào)零，取稀釋液進(jìn)行OD260, OD280測(cè)定，按照以下公式進(jìn)行RNA濃度的 計(jì)算： 終濃度（ng/μl）= (OD260)×(稀釋倍數(shù)n)×40

實(shí)驗(yàn)例

組織取樣量展示