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技術文章

小鼠白細胞介素6(IL-6)Elisa試劑盒說明書

點擊次數(shù):157 發(fā)布時間:2011-11-1

小鼠白細胞介素6(IL-6)Elisa試劑盒說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍: 96T
3pg/ml-120pg/ml
使用目的:
本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關液體樣本中白細胞介素-6(IL-6)含量。
實驗原理
小鼠白細胞介素6(IL-6)Elisa試劑盒說明書
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠白細胞介素-6(IL-6)水平。用純化的小鼠
白細胞介素-6(IL-6)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入白細
胞介素-6(IL-6),再與HRP 標記的白細胞介素-6(IL-6)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗
體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在
酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素-6(IL-6)呈正相關。用
酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中小鼠白細胞介素-6
(IL-6)濃度。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液20ml×1 瓶7 終止液6ml×1 瓶
2 酶標試劑6ml×1 瓶8 標準品(240pg/ml) 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板12 孔×8 條9 標準品稀釋液1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液6ml×1 瓶10 說明書1 份
5 顯色劑A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 張
6 顯色劑B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 個
標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
120pg/ml 5 號標準品150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液
60pg/ml 4 號標準品150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
30pg/ml 3 號標準品150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
15pg/ml 2 號標準品150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
7.5pg/ml 1 號標準品150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,
然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡
量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此
重復5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進行。
操作程序總結:
計算
以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的
OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),
即為樣品的實際濃度。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未
用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在5 分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD 值
大于標準品孔*孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 個月小鼠白細胞介素6(IL-6)Elisa試劑盒說明書

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