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真菌/酵母細胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧初級熒光測定試劑盒
點擊次數(shù)：303 發(fā)布時間：2015-1-27
YIJI真菌/酵母細胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧初級熒光測定試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）
主要用途
YIJI真菌/酵母細胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧初級熒光測定試劑是一種旨在通過透膜熒光染色劑二氯熒光乙
酰乙酸鹽，在細胞氧化條件下，產(chǎn)生熒光，來定量檢測細胞內(nèi)活性氧族的生成和增加的而經(jīng)典的技術(shù)
方法。該技術(shù)由大師級科學(xué)家精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種實驗用真菌/酵母菌株細胞內(nèi)氧化
應(yīng)激活性氧的分析。可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、衰老和代謝等的研究。產(chǎn)品嚴格無菌，即到即用，
操作簡易，活體檢測，性能穩(wěn)定，熒光清晰。
技術(shù)背景
真菌/酵母細胞是一種低等單細胞真核生物，具有細胞生長快，易于培養(yǎng)，遺傳操作簡單明了等原核生物的
特點。作為模式生物，它具有比較完備的基因表達調(diào)控機制和表達產(chǎn)物的加工修飾能力，在分子遺傳學(xué)方
面認識zui早，zui先作為外源基因表達的細胞宿主。超氧自由基陰離子（superoxide radical；O2-）、過氧化氫（hydrogen peroxide；H2O2）、羥自由基或氫氧基（hydroxyl radical；OH-）、過氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氫過氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、過氧亞硝基陰離子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinoneradical）、單線態(tài)氧氣（singlet oxygen）等細胞內(nèi)活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的產(chǎn)生和增多，將導(dǎo)致細胞衰老或凋亡。2',7'-二氯熒光乙酰乙酸鹽（2',7'-dichlorofluorescein diacetate，DCFH-DA）一種完全自由通過細胞膜的染色劑。一旦被過氧化氫、過氧化基、過氧亞硝基陰離子等氧化，便產(chǎn)生熒光。據(jù)此測定細胞內(nèi)活性氧族的濃度。據(jù)此測定細胞內(nèi)活性氧族的濃度。
產(chǎn)品內(nèi)容
YIJI清理液（Reagent A）
YIJI染色液（Reagent B）
YIJI稀釋液（Reagent C）
YIJI溶解液（Reagent D）
產(chǎn)品說明書
毫升
微升
毫升
毫升
1份
保存方式
保存 YIJI染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，嚴格避免光照；其余的保存在 4℃冰箱里，有效保
證 6月
用戶自備
1.5毫升離心管：用于真菌/酵母染色的容器
載玻片：用于染色觀察
微型臺式離心機：用于沉淀真菌/酵母細胞
培養(yǎng)箱或恒溫水槽：用于染色孵育
比色皿：用于熒光定量分析
（共聚焦）熒光顯微鏡：用于細胞熒光分析
細胞流式儀：用于細胞熒光分析
熒光分光光度儀：用于細胞熒光定量分析
實驗步驟
實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的 YIJI染色液（Reagent B）置入冰槽里融化。然后移出
xx微升 YIJI染色液（Reagent B）到新的 1.5毫升離心管，加入 xx微升 YIJI稀釋液（Reagent
C），混勻后，標記為 YIJI染色工作液，置入冰槽里。然后進行下列操作。
1．準備好 1毫升新鮮的酵母菌液（OD600＝1至 2；1 X 10細胞/毫升）
2．移入到 1.5毫升離心管
3．放進微型臺式離心機離心 5分鐘，速度為 3000g（或 6000RPM，例如 eppendorf 5415）
4 ．小心抽掉上清液
5．加入 xx毫升預(yù)冷的 YIJI清理液（Reagent A），混勻
6．放進微型臺式離心機離心 5分鐘，速度為 3000g（或 6000RPM，例如 eppendorf 5415）
7 ．小心抽掉上清液
8．重復(fù)實驗步驟 5至 7一次
9．加入 xx毫升含有 YIJI染色液（Reagent B）和 YIJI稀釋液（Reagent C）的 YIJI染
色工作液，混勻（注意：參見注意事項 7）
10．放進 28℃培養(yǎng)箱里或恒溫水槽孵育 20分鐘，避免光照
11．放進微型臺式離心機離心 5分鐘，速度為 3000g（或 6000RPM，例如 eppendorf 5415）
12．小心抽掉上清液
13．加入 xx毫升預(yù)冷的 YIJI清理液（Reagent A），混勻
14．放進微型臺式離心機離心 5分鐘，速度為 3000g（或 6000RPM，例如 eppendorf 5415）
15．小心抽掉上清液
16．加入 xx微升預(yù)冷的 YIJI清理液（Reagent A），混勻
17．放進冰槽里
18．選擇下列方式之一進行操作：
a)
即刻進行細胞流式儀分析：波長 488nm氬離子激光，觀察 50000個細胞以上――
波峰右移，表明活性氧族（ROS）含量高
b)
或使用（共聚焦）熒光顯微鏡觀察（定性檢測）：
1）移取 5微升上述細胞懸液到載波片上，蓋上蓋玻片
2）激發(fā)波長 490nm，散發(fā)波長 530nm――
綠色熒光增強，表明活性氧族（ROS）含量高
c)
或使用熒光分光光度儀檢測（定量檢測）：
1）移取 500微升上述細胞懸液到 1毫升比色杯
2）加入 500微升 YIJI溶解液（Reagent D）
3）上下傾倒混勻數(shù)次
4）室溫下，靜置 15分鐘，避免光照
4）放進熒光分光光度儀：激發(fā)波長 490nm，散發(fā)波長 530nm――RFU增高，表明活性氧族（ROS）含量高
注意事項
1． 本產(chǎn)品為 50次操作
2． 操作時，須戴手套
3． 操作時，避免污染母液
4． 建議染色完成后，即刻進行熒光檢測分析
5． 孵育時，必須避免光照
6． 本產(chǎn)品染色劑不易洗掉，染色持久
7． 根據(jù)不同菌株類型，可以調(diào)整 YIJI 染色工作液的使用劑量（1：100 至 1：1000 容量比），避免
過度染色
8． 本公司提供陽性對照甲萘醌溶液（YJ12041），觀察細胞熒光增強現(xiàn)象
9． 本公司同時提供 YIJI 真菌/酵母細胞細胞內(nèi)活性氧高質(zhì)熒光測定試劑盒（YJ10016.7），滿足不
同用戶需求
10．本公司提供系列活性氧分析試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標準
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰