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技術(shù)文章
炭疽免疫熒光檢測法
點擊次數(shù)：468 發(fā)布時間：2012-5-18
免疫熒光試驗（1F）用于炭疽與蠟樣芽孢桿菌繁殖體的鑒別表明：對于吸附反應(yīng)能否*消除交叉反應(yīng)，目前報道不一。IF與其他血清學(xué)診斷方法相比優(yōu)勢在于，能檢測菌群抗原異質(zhì)性。遺憾的是，人工微量流式記數(shù)速度太慢，敏感性也隨之下降。為提高其敏感性，采用流式細(xì)胞記數(shù)儀進(jìn)行記數(shù)。
另外，熒光與偶聯(lián)物的穩(wěn)定性、IgG分子內(nèi)聚集可能影響試驗的性。結(jié)果表明，炭疽與蠟樣芽孢桿菌芽孢較難區(qū)分，用帶有蠟樣芽孢桿菌芽孢偶聯(lián)物進(jìn)行吸附可大大減少炭疽和蠟樣的交叉反應(yīng)，此時蠟樣芽孢桿菌芽孢的熒光強度不超過炭疽芽孢桿菌芽孢對照的14％。免疫熒光試驗多克隆抗體檢測芽孢表面抗原。當(dāng)使用有交叉反應(yīng)的抗體時，免疫熒光檢測由于觀察結(jié)果的主觀性，可能對結(jié)果估計過高。定量熒光強度可克服該缺點，但需大量人力。
定量間接免疫熒光試驗采用普通光學(xué)顯微鏡增加光纖、測光系統(tǒng)。熒光定量過程中發(fā)現(xiàn)使用熒光素蛋白A（F-PA）比熒光素／羊抗兔蛋白（F-SAR）與芽孢結(jié)合率高兩倍，可代替F-SAR行使其功能。目前，免疫熒光檢測多采用顯微玻片和微孔板兩種載體。多點顯微鏡玻片與聚乙烯、聚苯乙烯相比本底低、信噪比高。