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冰凍切片氧化應(yīng)激活性氧（ROS）初級熒光測定試劑盒產(chǎn)品說明書
點擊次數(shù)：1850 發(fā)布時間：2014-11-24
YIJI 冰凍切片氧化應(yīng)激活性氧（ROS）初級熒光測定試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）
主要用途
YIJI 冰凍切片氧化應(yīng)激活性氧（ROS）初級熒光測定試劑是一種旨在通過透膜熒光染色劑二氯熒光乙
酰乙酸鹽，在組織氧化損傷條件下，產(chǎn)生熒光，來定量檢測冰凍組織內(nèi)活性氧族的存在狀況的而經(jīng)典
的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級科學(xué)家精心研制、成功實驗證明的。適宜于冰凍動物組織的分析。可以被用
于細胞凋亡、信號傳遞、衰老、代謝和營養(yǎng)學(xué)等的研究。產(chǎn)品嚴格無菌，即到即用，操作簡易，定性檢測，
性能穩(wěn)定。
技術(shù)背景
超氧自由基陰離子（superoxide radical；O2-）、過氧化氫（hydrogen peroxide；H2O2）、羥自由基或氫氧基
（hydroxyl radical；OH-）、過氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氫過氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷
氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、過氧亞硝基陰離子（peroxynitrite anion；ONOO-）
次氯酸（hypochlorous acid；HClO）、半醌自由基（semiquinone radical）、單線態(tài)氧氣（singlet oxygen）等
細胞內(nèi)活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的產(chǎn)生和增多，將導(dǎo)致細胞衰老或凋亡。2',7'-二氯熒光
乙酰乙酸鹽（2',7'-dichlorofluorescein diacetate，DCFH-DA）一種*自由通過細胞膜的染色劑。一旦被過
氧化氫、過氧化基、過氧亞硝基陰離子等氧化，便產(chǎn)生熒光。據(jù)此測定組織細胞內(nèi)活性氧族的濃度。
產(chǎn)品內(nèi)容
YIJI 清理液（Reagent A） 毫升
YIJI 染色液（Reagent B） 微升
YIJI 稀釋液（Reagent C） 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存 YIJI 染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，嚴格避免光照；其余的保存在 4℃冰箱里，有效保
證 12 月
用戶自備
1.5 毫升離心管：用于工作液配制的容器
培養(yǎng)箱：用于染色孵育
熒光顯微鏡：用于觀察熒光組織
實驗步驟
實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的 YIJI 染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，YIJI 稀釋液
（Reagent C）置于室溫預(yù)熱。然后移出
微升 YIJI 染色液（Reagent B）到新的 1.5 毫升離心管，
加入微升 YIJI 稀釋液（Reagent C），混勻后，標記為 YIJI 染色工作液，置入暗室里。然后進行下列操作。
1． 準備 5 片待測的厚為 10 微米的未經(jīng)固著處理的冰凍切片
2． 置于室溫下，小心加上
4． 小心加上 微升預(yù)冷的 YIJI 清理液（Reagent A），鋪滿整個切片表面
3． 小心移去切片上的 YIJI 清理液（Reagent A）微升室溫預(yù)熱的 YIJI 染色工作液，鋪滿整個切片表面
5． 在 37℃濕潤培養(yǎng)箱里，孵育 20 分鐘（注意：避免液體蒸發(fā)）
6． 小心移去切片上的 YIJI 染色工作液，避免光照
7． 小心加上 微升 YIJI 清理液（Reagent A），鋪滿整個切片表面
8． 小心移去切片上的 YIJI 清理液（Reagent A）
9． 放上蓋玻片或封片
10．即刻在熒光顯微鏡下觀察（定性檢測）：激發(fā)波長 490nm，散發(fā)波長 530nm――熒光增強，表明活性氧
族（ROS）含量高
注意事項
1． 本產(chǎn)品為 50 次操作
2． 所有操作均須無菌狀態(tài)下進行
3． 建議使用新鮮組織（手術(shù)切除后 1 小時內(nèi)）制成的冰凍切片
4． 操作時，須戴手套
5． YIJI 染色工作液避免光照
6． 孵育時，須避免光照
7． 建議組織染色完成后，即刻進行熒光定性分析
8． 本公司提供陽性對照甲萘醌溶液，觀察組織熒光增強現(xiàn)象
9． 本公司提供系列活性氧檢測試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標準
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰
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