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本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測谷物、飼料、食用油、啤酒、醬油等樣本中的玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEN）（又稱F-2 毒素），試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測時(shí)，加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本溶液，樣本中的玉米赤霉烯酮和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗玉米赤霉烯酮抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含玉米赤霉烯酮含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中玉米赤霉烯酮的殘留量。

2 技術(shù)指標(biāo)

2.1 試劑盒靈敏度：0.3ppb(ng/ml)

2.2 反應(yīng)模式：25℃，30min～15min

2.3 檢測下限：

谷物及配合飼料…………………6ppb

2.4 交叉反應(yīng)率：

玉米赤霉烯酮……………………100%

玉米赤霉酮………………………13%

玉米赤霉醇………………………＜1%

 2.5 樣本回收率：

谷物及配合飼料…………………90%±15%

3 試劑盒組成

酶標(biāo)板……………………………96孔

標(biāo)準(zhǔn)液（黑蓋）：各1ml

0ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb、24.3ppb

高標(biāo)準(zhǔn)液：1ppm……………………1ml

酶標(biāo)記物（紅蓋）…………………5.5ml

抗體工作液（藍(lán)蓋）………………5.5ml

底物液A（白蓋）……………………6ml

底物液B（黑蓋）……………………6ml

終止液（黃蓋）………………………6ml

20X濃縮洗滌液（白蓋）……………40ml

說明書………………………………1份

4 需要的器材和試劑

4.1 儀器：酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量0.01g）

4.2 微量移液器：單道20µl-200µl，100µl-1000µl、多道300µl

4.3 試劑：乙腈、正己烷、或二氯甲烷 

5 樣本前處理

5.1 樣本處理前須知：

實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

5.2 配液：

配液1：樣本提取液

    90%乙腈，即V乙腈:V去離子水=V9：V1。

5.3 樣本前處理步驟：

5.3.1 谷物（大米、玉米、小米等低脂含量）及配合飼料

處理方法 

1）稱取2g粉碎樣品于50ml離心管中，加8ml樣本提取液，振蕩5分鐘，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；

2）取0.5ml上清，加入2ml去離子水，混勻；

3）取50μl進(jìn)行分析。

    稀釋倍數(shù)：20    檢測下限：6ppb

6 酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟

    將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時(shí)可能會有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充玉米赤霉烯酮檢測試劑盒使用說明書分溶解，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。玉米赤霉烯酮檢測試劑盒使用說明書

實(shí)驗(yàn)開始前，用去離子水將20×濃縮洗滌液按20倍稀釋成工作洗滌液。

6.1 編    號：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

6.2 加樣反應(yīng)：加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中，然后加酶標(biāo)記物50µl/孔，再加入50µl/孔的抗體工作液，用蓋板膜封板，輕輕振蕩5秒混勻，25℃反應(yīng)30分鐘。

6.3 洗    滌：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用工作洗滌液250µl/孔充分洗滌5次，每次間隔30秒，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。

6.4 顯    色：每孔加入底物液A 50µl，再加底物液B 50µl，輕輕振蕩5秒混勻，25℃避光顯色15分鐘。

6.5 終    止：每孔加入終止液50µl，輕輕振蕩混勻，終止反應(yīng)。

6.6 測吸光值：用酶標(biāo)儀于450nm處測定每孔吸光度值（建議用雙波長450/630nm）。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。

7 結(jié)果分析

7.1 百分吸光率的計(jì)算

    標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以個標(biāo)準(zhǔn)液（0ppb）的吸光度值，再乘以100%，即