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小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA Kit

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產(chǎn)品型號48T/96T

品牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所在地上海市

更新時(shí)間:2018-01-01 13:32:01瀏覽次數(shù):332次

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上海研鑫生物科技有限公司專業(yè)提供科研類進(jìn)口原裝/分裝全系列品牌酶聯(lián)免疫ELISA試劑盒。產(chǎn)品種類齊全、現(xiàn)貨供應(yīng)質(zhì)量*保障,是多家科研機(jī)構(gòu)和高校ELISA試劑盒供應(yīng)商,歡迎各位新老客戶惠顧!如需咨詢相關(guān)產(chǎn)品信息或產(chǎn)品詳細(xì)說明請致電或在線客服: :www.shyxsw.net

小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA Kit

ELISA質(zhì)量保證是一個(gè)復(fù)雜的過程,許多重要的環(huán)節(jié)都影響到檢測的質(zhì)量
樣本處理及要求:
1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、者檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。
3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
5.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

一、方法學(xué)的影響

ELISA測定模式包括以下幾種:雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競爭抑制法,其中競爭抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作時(shí)差所引起的不公平競爭等因素的影響,結(jié)果重復(fù)性較差,質(zhì)量較難控制。

二、試劑因素

不同批次的ELISA試劑在制作過程中很難保證質(zhì)量**,即使是通過批批檢的項(xiàng)目其檢測結(jié)果也存在差異,因此必須選擇和訂購長批號的試劑,并保證保存條件。嚴(yán)格執(zhí)行這一標(biāo)準(zhǔn)可以避免因試劑批號改變而重新建立質(zhì)控體系及重新評估試劑的復(fù)雜過程,并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性;對于效期短、使用率低的試劑,應(yīng)當(dāng)小量分裝,每次使用則取分裝部分即可,避免反復(fù)凍融造成試劑的失效。

三、樣本因素

標(biāo)本干擾因素包括內(nèi)源性干擾因素和外源性干擾因素,前者包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、異嗜性抗體、自身抗體、*等,后者包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時(shí)間過長、標(biāo)本凝固不全、冷凍標(biāo)本的反復(fù)凍融等。

四、操作因素對ELISA結(jié)果的影響

ELISA操作步驟復(fù)雜,操作不當(dāng)將引起較大的誤差。以下敘述各個(gè)步驟中的影響因素。

1.加樣

2.溫育

3.洗滌

4.顯色

5.比色

 

五、灰區(qū)的設(shè)置

 

通常情況下,ELISA定性實(shí)驗(yàn)以“陽性”和“陰性”來報(bào)告結(jié)果,兩者間有一條分界線被稱為“陽性判斷值”(cut-off value,CO值),這是定性免疫測定結(jié)果報(bào)告的依據(jù)。

 

六、標(biāo)本復(fù)查

ELISA手工檢測過程復(fù)雜,影響因素較多,即使室內(nèi)質(zhì)控在控,也可能因孔間差異而造成結(jié)果的差異,因此加大復(fù)查力度是保證結(jié)果準(zhǔn)確性的可靠方法,比如對HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等項(xiàng)目的可疑、弱陽性標(biāo)本及少見模式的檢測結(jié)果進(jìn)行復(fù)查。

 

七、結(jié)果判斷和報(bào)告

常用下列幾種方法表示結(jié)果:

1.定性測定

2.半定量測定 結(jié)果一般以滴度表示。

3.定量測定 即用已知量的標(biāo)準(zhǔn)品作一系列稀釋后進(jìn)行ELISA測定,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果以量或單位表示。在ELISA定量檢測中每一塊反應(yīng)板都必須繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

4.結(jié)果報(bào)告

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