氧滅菌后對潔凈車間沉降菌的檢測":A:操作方法：對潔凈車間用食品廠臭氧機滅菌1小時后進行沉降菌檢測
B:名稱：潔凈區(qū)微生物檢測操作規(guī)程
C:關鍵詞：潔凈區(qū)、食品廠臭氧機、車間臭氧機、微生物檢測
D:目 的：尋得優(yōu)質食品廠臭氧機、車間臭氧機廠家 并規(guī)范潔凈區(qū)微生物檢測
E:原理：臭氧滅菌技術
F:適用范圍：100級、1萬、10萬、30萬級潔凈區(qū)環(huán)境。
1. 沉降菌檢測
1） 在萬級潔凈區(qū)內的關鍵操作點和潔凈室內每周檢測一次沉降菌和浮游菌；在10萬級潔凈區(qū)內其檢測頻次為每月檢測一次。30萬級每季度檢測一次沉降菌。
2） 由微生物檢測員按《養(yǎng)基的配制操作規(guī)程的要求配制肉湯瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)皿使用Φ90mm×15mm，于121℃濕熱滅菌20分鐘，取出備用。
3） 做好潔凈區(qū)消毒工作，開啟潔凈區(qū)凈化空調系統(tǒng)，正常運行不少于30分鐘；對單向流如100級的凈化工作臺和層流罩要在凈化系統(tǒng)運行10min后開始。
4） 靜態(tài)測試在除測試人員外，室內無生產人員的情況下進行，動態(tài)測試在已處于正常生產狀態(tài)下進行。
5） 采樣點布置選用對角線法，要求布置地面四個方向，工作線上左右，關鍵設備上放置一個。
6） 萬級、10萬級、30萬級的*少采樣點數可按下表確定。
| 面積m2 | 潔凈度級別10000 | 100000/300000 |
| <10 | 2 | 2 |
| ≥10~<20 | 2 | 2 |
| ≥20~<40 | 2 | 2 |
| ≥40~<100 | 4 | 2 |
| ≥100~<200 | 10 | 3 |
在滿足*少測點數的同時，還宜滿足*少培養(yǎng)皿數，見下表
| 潔凈度級別 | 所需Φ90mm×15mm（以沉降0.5h） |
| 100 | 14 |
| 10000 | 2 |
| 100，000/300,000 | 2 |
7） 百級區(qū)只有凈化工作臺下的局部范圍，其面積小于10m2，因此百級區(qū)取樣點至少為3個。
8） 測試人員按潔凈室級別規(guī)定的程序更換潔凈服進入潔凈區(qū)；靜態(tài)測試時，室內人員不得多于2人。
9） 將制備好的肉湯瓊脂培養(yǎng)基按采樣點布點位置離地0.8～1.5m處放置，打開培養(yǎng)皿蓋，暴露30分鐘，檢測人員及時填寫記錄，記錄房間溫濕度，壓差及測試狀態(tài)。
10） 蓋好皿蓋，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱內，在30～35℃中培養(yǎng)48小時，并用3只培養(yǎng)皿作對照。
11） 用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細觀察平皿上所有菌落數，要注意菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，然后用5～10倍放大鏡檢查有否遺漏。
12） 計算平均菌落數 =（M1＋M2……＋Mn）／n，式中 M1：1號培養(yǎng)皿菌落數，M2：2號培養(yǎng)皿菌落數，n： 培養(yǎng)皿數。
13） 用平均菌落數判斷潔凈室空氣中的微生物， 潔凈區(qū)的平均菌落數（靜態(tài)測試）：100級≤1個/皿，萬級≤3個／皿，10萬級≤10個／皿，30萬級≤15個／皿。
14） 如超過標準，則必須對此區(qū)域重新消毒，重新采樣兩次，測試結果均須合格；否則要向質量管理部經理通報，并采取相應的措施。
15） 檢測人員必須向QA部門發(fā)“潔凈級別檢測記錄”，取樣和微生物培養(yǎng)及檢測人員均要在記錄上簽名，QA部門主管審核，記錄由質量管理部保存三年。
2. 浮游菌檢測
1） 對萬級和10萬級潔凈區(qū)要進行浮游菌的檢測，在萬級區(qū)內的關鍵操作點和潔凈室內每周檢測一次，10萬級潔凈區(qū)內其檢測頻次為每月檢測一次。
2） 浮游菌取樣使用浮游菌采樣器，采樣器必須要有流量計和定時量，并按儀器的檢定周期，定期對儀器作檢定，以保證測試數據的可靠性。
3） 采樣器進入被測房間前要先用消毒劑滅菌，用于100級潔凈室的采樣器是一直放在房間內；采樣時使用規(guī)定為Φ150mm×15mm培養(yǎng)皿。
4） 由微生物檢測人員按《培養(yǎng)基的配制操作規(guī)程》的要求配制營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，于121℃濕熱滅菌20分鐘，取出備用。
5） 浮游菌取樣與沉降菌一樣可分為靜態(tài)測試和動態(tài)測試兩種狀態(tài)；各種潔凈度的采樣點數目和*小采樣量如下表所示。
浮游菌取樣點數目及*小采樣量
| 潔凈度級別 | 面積m2 | *少采樣點 | *小采樣量（L/次） | 驗證 監(jiān)測 驗證 監(jiān)測 |
| 100 | ＜10 | 3 | 1000 | 600 |
| 10000 | ＜40 | 2 | 500 | 400 |
| 100000 | ＜100 | 2 | 100 | 50 |
6） 采樣點布點位置離地0.8～1.5m處放置，送風口測點位置離開送風面30cm左右；可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍增加測點；采樣點的布置與5）相同。
7） 對單向流如l00級凈化工作臺，測試要在凈化空調系統(tǒng)正常運行不少于l0min后開始；對非單向流，如緩沖室、培養(yǎng)室，測試要在凈化空調系統(tǒng)正常運行不少于30min后開始。
8） 采樣者必須穿戴與被測潔凈區(qū)域相應的工作服，在轉盤上放入或調換培養(yǎng)皿前，雙手要用消毒劑消毒；培養(yǎng)皿表面必須嚴格消毒。
9） 采樣口及采樣管在使用前必須高溫滅菌，要用消毒劑消毒采樣器的盤，轉盤以及罩子的內外面；對采樣管的外壁和內壁進行消毒后，要將管中的殘留液倒掉并晾干。
10） 儀器經消毒后先不放入培養(yǎng)皿，先接通電源，啟動真空抽氣泵抽氣不少于5min，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)。
11） 調好流量，轉盤轉速，已知采樣器的流量（L/min ），設定采樣時間（min），相乘即采樣量（L）；關閉真空泵。
12） 檢查每個培養(yǎng)皿的質量，培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿有變質、破損或污染的不能使用，放入培養(yǎng)皿，蓋上蓋子后調節(jié)采樣器縫隙高度。
13） 對于單向流或逆風口，采樣器采樣管口朝向應正對氣流方向，對于非單向流采樣管口向上，布置采樣點時，至少應離開塵粒較集中的回風口lm以上。
14） 除百級區(qū)外，在其他潔凈室采樣時，要在送風口和關鍵部位各進行一次采樣，每個采樣點只采樣一次。
15） 置采樣口于采樣點后，開啟采樣器，采樣時，測試人員要站在采樣口的下風側，靜態(tài)測試時，室內人員不得多于2人。
16） 采樣結束后取出培養(yǎng)皿，蓋上皿蓋并編號，注意防止采樣管對樣本的污染；要用消毒劑噴射罩子的內壁和轉盤，將采樣過程記錄在“潔凈級別檢測記錄”上。
17） 全部采樣結束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中30℃~35℃培養(yǎng)48h；每批培養(yǎng)基可選3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)，檢驗培養(yǎng)基本身是否污染。
18） 用肉眼直接計數，標記或菌落計數器上點計，然后用500倍放大鏡檢查，有否遺漏，若平板上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數。
19） 浮游菌評定標準：100級≤5/m3，萬級≤100/m3，10萬級≤500/m3
20） 微生物檢測人在“潔凈級別檢測記錄”上記錄檢測數據，并交QA部門主管審批，每個測點的浮游菌平均濃度必須低于設定的潔凈度標準的規(guī)定。
21） 若某測點的浮游菌平均濃度超過評定標準，則必須對此區(qū)域先行消毒，然后重新取樣兩次，兩次測試結果必須合格；否則要向質量管理部經理通報，并要采取相應的措施。
車間凈化無菌級別請參照國家消毒標準。
