DMEM-高糖液體無(wú)丙酮酸鈉、HEPES C0162-819 500ml
產(chǎn)品說(shuō)明：
DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）高糖培養(yǎng)基是廣泛用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的一種基礎(chǔ)培養(yǎng)基。其高糖版本含有較高的葡萄糖濃度，通常適用于對(duì)糖需求較高的細(xì)胞類型，比如某些類型的癌細(xì)胞或是快速增殖的細(xì)胞。
以下是使用DMEM高糖培養(yǎng)基的基本步驟：
準(zhǔn)備培養(yǎng)基
1. 配制培養(yǎng)基：
- 如果使用的是干粉形式的培養(yǎng)基，首先制備新鮮的三蒸水或超純水。
- 根據(jù)所需的最終體積稱量適量的干粉培養(yǎng)基，并將其溶解在大約半量的水中。
- 溶解完畢后，補(bǔ)足剩余的水量至最終體積。
- 攪拌直至溶解，確保沒(méi)有顆粒殘留。
2. 過(guò)濾除菌：
- 使用0.22 μm的無(wú)菌過(guò)濾器過(guò)濾培養(yǎng)基，以除去可能存在的微生物。
3. 加熱滅菌（如果適用）：
- 雖然過(guò)濾已經(jīng)可以達(dá)到無(wú)菌，但有些實(shí)驗(yàn)室可能會(huì)選擇高壓滅菌。
- 然而，高壓滅菌可能會(huì)破壞培養(yǎng)基中的某些成分，因此不是必需步驟。
4.冷卻：
- 將培養(yǎng)基冷卻至室溫或接近室溫，準(zhǔn)備添加其他補(bǔ)充物。
添加補(bǔ)充物
1. 添加血清：
一般添加10%的胎牛血清（FBS），但根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，這個(gè)比例可能有所不同。
2. 添加抗生素：
- 如雙抗，用于防止細(xì)菌污染。
3. 其他補(bǔ)充物：
- 可能需要添加額外的氨基酸、維生素或其他營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充物，這取決于具體的細(xì)胞培養(yǎng)需求。
調(diào)節(jié)pH值
1.使用pH計(jì)：
- 在無(wú)菌條件下，使用pH計(jì)將培養(yǎng)基的pH值調(diào)節(jié)到7.2-7.4之間。
- DMEM培養(yǎng)基通常使用碳作為緩沖系統(tǒng)，需要在含有5-10% CO?的環(huán)境中維持生理pH值。
使用培養(yǎng)基
1.預(yù)熱：
- 在使用前，將培養(yǎng)基預(yù)熱至37°C，以匹配細(xì)胞培養(yǎng)箱的溫度。
2.無(wú)菌操作：
- 在細(xì)胞培養(yǎng)的所有步驟中，都應(yīng)遵循無(wú)菌操作原則，以防止污染。
3. 避免凍融循環(huán)：
- 一旦配制好的培養(yǎng)基應(yīng)避免凍融，因?yàn)檫@可能影響其性能。
4. 使用期限：
- 配制的培養(yǎng)基需要在兩周內(nèi)使用完畢，以保證其質(zhì)量和效果。
5. 細(xì)胞接種：
- 將適當(dāng)數(shù)量的細(xì)胞接種到含有DMEM高糖培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿或瓶中，按照細(xì)胞的生長(zhǎng)特性進(jìn)行后續(xù)的培養(yǎng)。
請(qǐng)記得，不同的實(shí)驗(yàn)室和不同的細(xì)胞系可能有其特定的培養(yǎng)條件和偏好，因此上述指導(dǎo)原則可能需要根據(jù)具體情況作出調(diào)整。
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