ELISA技術自20 世紀70年代初問世以來，發(fā)展非常迅速，目前被廣泛應用于免疫學、醫(yī)學、生物學等許多領域。其基本原理是根據(jù)抗原或抗體能在一定條件下結(jié)合到固相載體的表面仍保持其免疫活性，抗原或抗體與酶結(jié)合形成的結(jié)合物仍能保持免疫學和酶的活性。結(jié)合物與相應的抗原、抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入相應的酶底物的顏色反應來判斷有無相應的免疫反應，而且顏色的深淺與相應的抗原或抗體的量在一定的范圍內(nèi)成正比。由于抗原、抗體的反應在1 種固相載體——聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應物，從而保證實驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。了解實驗原理后同時也必須做好實驗的前期準備。
 

一、儀器準備：
 

　　酶標儀(ELISA Reader)，微量可調(diào)加樣器1套(10、20、100、200、1000 μL)，恒溫培養(yǎng)箱，pH 計，沖洗器，洗滌瓶，康氏管，50 mL燒杯，吸管。96孔酶標板或48孔酶標板。
 

　　二、試劑準備：
 

　　1. 包被液：0.05 M pH9.6碳酸鹽緩沖液(Na2CO3 1.59 g, NaHCO3 2.93 g, 加水至1000 mL，4℃可保存1周)。
 

　　2. 封閉液：5% 脫脂奶粉或0.3% BSA
 

　　3. 洗滌液：0.15 M pH7.4 PBS-T(0.2 g KH2PO4,2.9 g Na2HPO4?12H2O,8 g NaCl, 0.2 g NCl,0.5mL Tween-20,加水至1000 mL，4℃保存)
 

　　4. 底物液：pH5.0 的磷酸鹽-檸檬酸緩沖液(0.1 M 檸檬酸24.3 mL，0.2 M磷酸鹽25.7 mL，加水50 mL，混勻)，臨用前，在上述緩沖液中溶解40 毫克鄰苯二胺(Ortho-Phenglendiaruine, OPD)，然后加入30%雙氧水0.15 毫升，底物對光敏感，需要避光并立即使用。
 

　　5. 陽性對照液：1：100用HAT培養(yǎng)基稀釋的小鼠血清。陰性對照液為HAT培養(yǎng)基
 

　　6. 辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠IgG 酶標結(jié)合物。
 

　　7. 2 M H2SO4
 

　　8. 抗原溶液