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上海佰利萊生物科技有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第3年

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PCR反應(yīng)詳細(xì)基本步驟

時(shí)間：2024/6/20閱讀：168
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　　聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(Polymerase chain raction ,PCR)是一種在體外擴(kuò)增特定DNA片段的方法，具有特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡(jiǎn)便、重復(fù)性好、易自動(dòng)化等突出優(yōu)點(diǎn)，可用很短時(shí)間使目的基因或某一片段擴(kuò)增十萬(wàn)乃至幾百萬(wàn)倍。PCR反應(yīng)基本步驟：
 
　　1、變性：根據(jù)DNA高溫變性的原理，將反應(yīng)體系溫度升至變性溫度(高于模板熔點(diǎn)，約95℃)，使目的DNA雙鏈裂解成PCR模板(單鏈)。[95℃，30s]
 
　　2、退火：將反應(yīng)體系溫度驟降至退火溫度(低于引物熔點(diǎn)約55℃)，是PCR引物與PCR模板3’端雜交，稱(chēng)為退火。[55~65℃，30s]
 
　　3、延伸：將反應(yīng)體系溫度升至延伸溫度(約72℃)，DNA聚合酶按照堿基配對(duì)原則在引物3’端以5’→3’方向催化合成PCR模板新的互補(bǔ)鏈，使目的DNA拷貝數(shù)增加1倍。[72℃，30~60s]
 
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